[发明专利]一种具有木质纤维素和有机氯酚协同降解功能的复合菌

权利要求书

1.一种具有木质纤维素和有机氯酚协同降解功能的复合菌的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将滤纸和有机氯酚储备液加入不灭菌的液体培养液中，加入蘑菇渣进行第一阶段筛选驯化，在滤纸出现断裂和碎化时进行下一代转接，得到具有纤维素和有机氯酚降解能力的两组复合菌；每100mL不灭菌的液体培养液添加4g蘑菇渣；筛选第一阶段培养液的添加量为150mL，每100mL不灭菌的液体培养液添加1g滤纸；每150mL不灭菌的液体培养液添加50μL有机氯酚储备液；筛选驯化过程中微生物的接种量为10％，继代培养驯化30-35代；

所述的不灭菌的液体培养液采用如下方法制备：取蛋白胨2.5g，Na₂HPO₄ 1.5g，KH₂PO₄1.5g，MgCl₂·6H₂O 0.8g，CaCl₂·2H₂O 0.8g，酵母膏0.8g，微量元素1mL/L，加蒸馏水定容至1000mL，摇匀，得到不灭菌的液体培养液；

所述有机氯酚储备液是将有机氯酚混合溶于乙醇中配成质量体积比为15％的有机氯酚储备液，所述的有机氯酚为邻氯苯酚、2，4-二氯酚和2，4，6-三氯酚；

(2)将步骤(1)中经筛选驯化的具有纤维素和有机氯酚降解能力的两组复合菌共混后转接到含有水稻秸秆和有机氯酚的不灭菌的液体培养液中进行第二阶段筛选驯化，在水稻秸秆分解成丝状时进行下一代转接，得到具有木质纤维素和有机氯酚降解能力的复合菌OEM1；每100mL含有水稻秸秆和有机氯酚的不灭菌的液体培养液添加0.5g水稻秸秆；筛选第二阶段含有水稻秸秆和有机氯酚的不灭菌的液体培养液的添加量为100mL，每100mL含有水稻秸秆和有机氯酚的不灭菌的液体培养液添加50μL有机氯酚储备液；筛选驯化过程中菌液的接种量为10％，继代培养驯化10-15代。

2.根据权利要求1所述的具有木质纤维素和有机氯酚协同降解功能的复合菌的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的邻氯苯酚、2，4-二氯酚和2，4，6-三氯酚的质量比为1∶1∶1。

3.根据权利要求1所述的具有木质纤维素和有机氯酚协同降解功能的复合菌的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的微量元素采用如下方法制备：取MnCl₂·4H₂O 0.1g，CoCl₂·6H₂O 0.17g，ZnCl₂ 0.10g，CaCl₂ 0.20g，H₃BO₄ 0.019g，NiCl₂·6H₂O 0.05g，Na₂MoO₄·2H₂O 0.020g，CuSO₄·5H₂O 0.1g，加蒸馏水至1000mL，用氢氧化钠调节pH值至中性，得到微量元素。

4.根据权利要求1所述的具有木质纤维素和有机氯酚协同降解功能的复合菌的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述的蘑菇渣为蘑菇培植后遗弃的生长基质。

5.根据权利要求4所述的具有木质纤维素和有机氯酚协同降解功能的复合菌的制备方法，其特征在于，所述的蘑菇为平菇、杏鲍菇或草菇中的至少一种。

6.根据权利要求1所述的具有木质纤维素和有机氯酚协同降解功能的复合菌的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的水稻秸秆采用如下方法进行处理：将水稻秸秆用1％氢氧化钠溶液浸泡1天后，用自来水冲洗至中性，烘干，剪成0.3-0.5cm长。

7.一种具有木质纤维素和有机氯酚降解能力的复合菌OEM1，由权利要求1-6任一项所述的制备方法得到。

8.权利要求7所述的具有木质纤维素和有机氯酚降解能力的复合菌OEM1应用于降解木质纤维素和有机氯酚，所述的有机氯酚为邻氯苯酚、2，4-二氯酚和2，4，6-三氯酚。

9.根据权利要求8所述的具有木质纤维素和有机氯酚降解能力的复合菌OEM1的应用，其特征在于，所述的具有木质纤维素和有机氯酚降解能力的复合菌OEM1应用于降解含有0.5-4.0％木质纤维素和50-75mg/L有机氯酚的底物；所述的降解的条件为于28℃、120r/min、降解12d；所述的具有木质纤维素和有机氯酚降解能力的复合菌OEM1的接种量为10％。