[发明专利]一种测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法

权利要求书

1.一种测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：

(1)采集表层海水，分别通过2.0μm滤膜和20μm筛绢预过滤，分别往过滤后的海水中加入³H-亮氨酸示踪培养，使³H-亮氨酸在海水中的浓度为5-40nM，培养0.5-2h，得到两个实验样品；取同样的海水分别通过2μm滤膜和20μm筛绢预过滤，加入三氯乙酸，使三氯乙酸在海水中的体积浓度为5％，在相同条件下培养，得到两个空白对照样品；

(2)培养结束后，往实验样品中加入三氯乙酸停止反应，三氯乙酸加入量使其在溶液中的体积溶度为5％，30min后，将样品分别过滤到2.0μm和0.22μm孔径的25mm直径硝酸纤维膜上，过滤结束后，先用三氯乙酸冲洗三次，然后用酒精冲洗三次，待完全干燥后再收集滤膜，用锡纸包好冷冻保存；

(3)膜样加入乙酸乙酯溶解滤膜，加入闪烁液，用液体闪烁计数仪测定样品的放射性活度；

细菌生产力的计算按照以下公式：

BP＝U×k/S/(t·V)*3.1

其中U为样品净计数，即实验样品DPM减去对照样品的DPM数；k为活度计数与居里数的转化参数；S为所加入的³H-亮氨酸的比活度Ci/mmol，3.1为亮氨酸与细胞碳的转换系数gC/mmol，t和V分别是培养时间和过滤水样体积；

通过20μm筛绢预处理培养样品的细菌生产力为0.22μm硝酸纤维滤膜测定值减去2.0μm硝酸纤维滤膜测定值，为BPG；

通过2.0μm滤膜预处理培养样品的细菌生产力为0.22μm硝酸纤维滤膜测定值，为BPN；

微型鞭毛虫对细菌生产力的摄食率μgC.L^-1.h^-1＝BPN-BPG

微型鞭毛虫对细菌生产力的摄食压力％＝(BPN-BPG)/BPN)。

2.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：步骤(1)中，采集表层1m处的海水。

3.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：步骤(1)中，培养过程中，通过泵吸取同深度采集处的海水来控制培养温度与同深度采集处的表层水一致。

4.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：步骤(2)中，停止反应所用的三氯乙酸的体积浓度为50％。

5.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：步骤(2)中，冲洗所用的三氯乙酸的体积浓度为5％。

6.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：步骤(2)中，冲洗所用的酒精的体积浓度为80％。

7.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：步骤(3)中，每0.3mL样品中加入1mL乙酸乙酯溶解滤膜，加入10mL闪烁液。

8.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述的闪烁液为Ultima Gold,Packard。

9.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：本发明方法测定的是2-20μm微型浮游动物的摄食率。

10.如权利要求1所述的测定微型鞭毛虫对细菌生产力摄食速率的方法，其特征在于：步骤(1)中采用5μm滤膜或10μm筛绢，来测定<5μm和10μm鞭毛虫的摄食速率。