[发明专利]毛诃子肉丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及一种毛诃子肉丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及它在治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。

背景技术

毛诃子肉为使君子科植物毛诃子（Terminalia bellirica Roxb）的干燥果实，毛诃子为落叶乔木，高12-15 m，胸径可达1 m，枝灰色，具纵纹，小枝幼叶及叶柄基部常具锈色绒毛。叶螺旋状集生枝顶，叶柄长3-9 cm，无毛，穗状花序腋生。秋冬季果实成熟时采摘，晒干。我国生产于云南南部、新疆，国外分布于越南、老挝、泰国等。

毛诃子果实生干生寒、纯化异常血液质和清除烧焦体液，止泻固涩，补脑，明目、滋补肠胃，散气消痣。主治湿热性或血液质疾病，如胃肠原性腹泻，肠内烧焦体液增多，脑虚视弱，迎风流泪，肠胃虚弱，气结痔疮等。现代药理研究表明，毛诃子果实能促进胆汁分泌，使胆汁内总固体含量有明显的增加，且小鼠口服醇提取对的LD₅₀为4.25 mg/kg。

在高通量筛选的过程中，本发明意外地发现大叶毛诃子肉具有很好的抑制丁酰胆碱酯酶的活性，该活性提取物及其组合物有望应用于治疗阿尔茨海默病(AD)等方面的医药用途。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种毛诃子肉提取物。

本发明还提供了以毛诃子肉提取物为主要活性成分的组合物。

本发明同时提供了毛诃子肉提取物及其组合物的制备和应用。

本发明是通过如下技术方案实现的：

维吾尔药毛诃子肉经甲醇超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，用石氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱（氯仿-甲醇，比例见表1），各氯仿-甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外筛选体系测试其丁酰胆碱酯酶抑制活性，意外地发现先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿：甲醇，100:1，体积比）洗脱，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿：甲醇，100:6，体积比）洗脱得到的氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿：甲醇，100:6，体积比）洗脱液经回收有机溶剂，干燥，即为丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物。而其他比例的洗脱部位，没有丁酰胆碱酯酶抑制活性的作用。特别地，优选为先用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:1，体积比）洗脱25倍柱体积，继用氯仿-甲醇混合溶剂（氯仿-甲醇，100:6，体积比）洗脱20倍柱体积，洗脱液干燥后即为本发明丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物。丁酰胆碱酯酶抑制活性的提取物可以通过以上方法得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该毛诃子肉丁酰胆碱酯酶抑制活性提取物从未见文献报道，其薄层色谱（TLC）分析结果见图1，TLC分析条件：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1）显色方法：香草醛-硫酸显色。

具体，发现过程如下：

1、毛诃子肉经甲醇超声提取物的制备

取维吾尔药毛诃子肉20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0047 样品7.0540 g，留样4.2032 g，上柱2.8508 g，拌样硅胶3 g，空白硅胶10g，氯仿-甲醇系统。

2、氯仿-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果

取维吾尔药毛诃子肉20 g，经100 mL甲醇超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0047 样品7.0540 g，留样4.2032 g，上柱2.8508 g，甲醇溶解，共用甲醇15 mL。上硅胶柱色谱，拌样硅胶3 g，空白硅胶10 g，玻璃柱内径1.6cm，氯仿-甲醇系统梯度洗脱（条件见表1），柱体积22 mL，每个梯度洗脱200mL，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，石油醚：丙酮梯度洗脱提取物，TLC分析结果见图2，图3，TLC分析条件：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：氯仿：乙酸乙酯：甲醇（3:1:1），氯仿：乙酸乙酯：甲醇（1:1:1），显色方法：香草醛-硫酸显色。

表1

3、抑制丁酰胆碱酯酶活性筛选方法和结果

1)        实验条件

a、材料：DMSO(二甲基亚砜) (科密欧公司)；KH₂PO₄、K₂HPO₄·3H₂O(广东汕头市西陇化工厂)；BuChE酶(美国Sigma公司)；PNPG(美国Sigma公司)