[发明专利]泡囊草抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法

说明书

技术领域

本发明属医药技术领域，具体涉及一种哈萨克药泡囊草抗肿瘤提取物及其组合物的医药用途和制备方法以及其在在制备预防及治疗肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌、脑胶质瘤等恶性肿瘤药物中的应用。

背景技术

本品为茄科泡囊草属植物泡囊草的根及根茎或全草。拉丁名：Physochlaina physaloides (L.)G. Don.，分布于阿尔泰山，天山东部及中部山地草原，林原。产阿勒泰地区。多年生草本，高30-50cm，根状茎可发出一至数茎。叶卵形，顶端急尖，基部宽楔形，全缘。花序为伞形或聚伞花序；花冠漏斗状，紫色，筒部色淡，花柱显著伸出花冠。蒴果。种子扁肾形，黄色。花期4-5月，果期5-7月。初夏植物生长繁茂期采全草，阴干。地上部枯萎期挖根，去净泥土、晒干。

本品气微，味微苦。镇痛，镇静。主治治劳伤、心慌不安。全草可消毒剂。根作泻剂并治皮肤病，花和茎可作止血剂。

本发明通过系统地筛选研究，意外地发现泡囊草提取物具有显著抗肿瘤活性，即泡囊草提取物对脑胶质瘤、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌等恶性肿瘤的具有很好的预防及治疗作用。该活性提取物及其组合物有望应用到多种癌症的预防和治疗上。

发明内容

本发明所解决的技术问题是提供一种泡囊草提取物。

本发明还提供了以泡囊草提取物为主要活性成分的组合物。

本发明同时提供了泡囊草提取物及其组合物的制备和应用。

本发明是通过如下技术方案实现的：

哈萨克药泡囊草经水超声提取，提取液浓缩后，用硅胶柱分离，上样后的硅胶柱，用二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱（二氯甲烷：甲醇，比例见表1），各二氯甲烷：甲醇比例混合溶剂洗脱液，浓缩，干燥后，利用体外抗肿瘤活性筛选体系测试其抗肿瘤活性，意外地发现先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:00，体积比）洗脱，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:10，体积比）洗脱，洗脱得到的二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷：甲醇=100:10，体积比）洗脱液经回收溶剂，干燥，即为抗肿瘤活性提取物，而其他比例的洗脱部位，没有抗肿瘤活性。特别地，优选为先用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:00，体积比）洗脱10倍柱体积，继用二氯甲烷-甲醇混合溶剂（二氯甲烷-甲醇，100:10，体积比）洗脱15倍柱体积，洗脱液干燥后即为本发明抗肿瘤活性的化合物。抗肿瘤活性的化合物可以通过以上方法，得到富集，从而与其他杂质类成分分离开。该活性提取物从未见文献报道，其TLC分析表征如图1，TLC分析条件为：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1 显色方法：香草醛浓硫酸显色。

具体，发现过程如下：

1、泡囊草经水超声提取物的制备

取哈萨克药泡囊草20 g，经100 ml水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0242B，样品0.7163 g，留样0.0399 g，二氯甲烷-甲醇系统洗脱。

2、二氯甲烷-甲醇混合溶剂梯度洗脱方法和结果

取哈萨克药泡囊草20 g，经100 ml水超声提取15 min，提取液浓缩后，得提取物SN0242B，样品0.7163 g，留样0.0399 g。上柱，甲醇溶解，共用甲醇15ml。上硅胶色谱，甲醇溶解，拌样硅胶2.5 g，空白硅胶10 g，玻璃柱内径2.0 cm，二氯甲烷-甲醇系统洗脱（条件见表1），柱体积22 ml，每个梯度洗脱200 ml，得到，各个浓度提取洗脱液的洗脱物，回收溶剂，即得，二氯甲烷：甲醇梯度洗脱提取物，收率见表1，TLC分析结果见图2，TLC分析条件为：GF₂₅₄硅胶板，展开系统：二氯甲烷：乙酸乙酯：甲醇=6:1:1 显色方法：香草醛浓硫酸显色。

表1

3、抗肿瘤活性筛选方法和结果

1）实验条件

a) 细胞株信息

大鼠脑胶质瘤细胞株C6细胞购于中国典型培养物保藏中心细胞库。

b) 药品及试剂

样品无菌条件下，DMSO 溶解配置成母液浓度为100mg/mL，使用时用RPMI-1640 培养液稀释至所需浓度（DMSO≤1 ‰）。

RPMI Medium 1640培养基干粉购于美国GIBCO公司。胎牛血清购于北京元亨圣马生物技术研究所。Trypsin 1:250、二甲基二苯基四氮唑溴盐（MTT）。

c) 仪器