[发明专利]一种快速鉴别三种仔猪病毒性腹泻的分子试剂盒与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒的试剂盒。

背景技术

随着集中化养猪的规模日益扩大，猪的腹泻疾病变得日趋严重。而引起仔猪腹泻疾病的病原研究证实有而且还在不断增加大肠杆菌、沙门氏菌、魏氏梭菌、猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、温和猪瘟、猪痢疾、猪球虫等。而由猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒引起的仔猪病毒性腹泻疾病日趋增多，该三类疫病能引起仔猪的高发病率和高死亡率，且有部分地区已经呈现出混合感染和继发感染的现象，对养猪业造成了极大的损失。鉴于这三种病毒在生产中对仔猪危害极大，包括我国在内的许多国家和地区为预防和控制这三种主要的腹泻类疫病，投入了大量的人力、物力、财力，但却收效甚微。

由于该三类腹泻类疫病在临床症状及流行趋势上都极其相似，尚无有效疫苗能将疫情控制，因此在临床诊断、治疗，以及防治上有极大的难度。临川症状具体表现在：一般2周龄以内的仔猪感染后12-24小时会出现呕吐，继而出现严重的水样或糊状腹泻，粪便呈黄色，常夹有未消化的凝乳块，恶臭，体重迅速下降，仔猪明显脱水，发病2-7天死亡，死亡率达100％；在2-3周龄的仔猪，死亡率在0-10％；断乳猪感染后2-4天发病，表现水泻，呈喷射状，粪便呈灰色或褐色，个别猪呕吐，在5-8天后腹泻停止，极少死亡，但体重下降，常表现发育不良，成为僵猪；一些耐过猪和呈隐形感染的猪群往往也是带毒猪。

传统的检测这三种疾病的方法如病毒分离鉴定和血清检查，往往耗时过长。最近国外和国内均建立了RT-PCR/PCR检测方法，以及多重PCR检测方法，如，公开号为103409558的专利申请公开了一种同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒以及猪轮状病毒的多重PCR引物组，其对PEDV、TGEV、PoRV的最低检测浓度分别为4.75ng/μL、31.1ng/μL、38.625ng/μL。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种特异性强、灵敏度高的可同时检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂盒。

本发明检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂盒，它包括SEQ ID NO：1～2、SEQ ID NO：3～4和SEQ ID NO：5～6所示引物对，分别特异扩增猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因。

其中，所述猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因分别如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示。

其中，所述试剂盒还包括SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的基因片段，作为阳性对照。

本发明提供了SEQ ID NO：1～2、SEQ ID NO：3～4和SEQ ID NO：5～6所示引物对在制备检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂中的用途。

其中，所述检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的试剂是扩增猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因的试剂。

其中，所述猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因分别如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示。

其中，所述试剂还包括SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示的基因片段，作为阳性对照。

本发明还提供了SEQ ID NO：1～2、SEQ ID NO：3～4和SEQ ID NO：5～6所示引物对在扩增猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因中的用途。

所述猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒的基因分别如SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9所示。

本发明三对引物组成的试剂盒可以有效检测猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪轮状病毒，三对引物之间无相互干扰，灵敏度高，三种病毒的最低检测浓度低至3.80×10^-5pg/μL、8.54×10^-5pg/μL、5.59×10^-5pg/μL，比现有检测方法的最低检测限低了8个数量级，且特异性强，耗时短，检测快速，具有良好的应用前景。