[发明专利]用于检测GDNF剪接变异体1、3的实时荧光定量PCR专用引物

权利要求书

1.用于检测GDNF剪接变异体1、3的实时荧光定量PCR专用引物，其特征在于其为特异性双向引物，其上游引物为SEQIDNO.1，下游引物为SEQIDNO.2。

2.根据权利要求1所述的用于检测GDNF剪接变异体1、3的实时荧光定量PCR专用引物，其特征在于所述引物用于检测人组织或细胞内的pre-(α)pro-GDNF。

3.根据权利要求1或2所述的用于检测GDNF剪接变异体1、3的实时荧光定量PCR专用引物，其特征在于所述引物用于检测人组织或细胞内剪接变异体1(GenecodeNO.：NM_000514.3)和剪接变异体3(GenecodeNO.：NM_001190468.1)表达量。

4.一种应用权利要求1所述的PCR专用引物检测GDNF剪接变异体1、3表达水平的实时荧光定量方法，其特征在于其包括如下步骤：人组织或细胞cDNA标准品的制备，以样品cDNA为模板，利用本发明提供的引物进行荧光定量PCR，建立实时荧光定量PCR的体系。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于应用480SystemRealTimePCR扩增仪，其指标均按以下程序进行：95℃预变性30秒，1Cycle；95℃变性5秒，60℃退火20秒，72℃延伸10秒，40Cycles。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于将所有DNA样品分别配置RealtimePCR反应体系；该体系配置如下：PremixExTaq(TAKARADRR041A)10μl，PCRForwardPrimer(SEQIDNO.1，10μM)0.5μl，PCRReversePrimer(SEQIDNO.2，10μM)0.5μl，cDNA模板1μl，dH₂O8μl。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于配置RealtimePCR反应体系后，轻弹管底将溶液混合，5000rpm短暂离心；将19μl混合液加到PCR板对应的每个孔中，再加入对应的1μlDNA，小心粘上封口膜，并短暂离心混合；在设置PCR程序前将准备好的PCR板放在冰上。

8.一种用于检测GDNF剪接变异体1、3表达水平的实时荧光定量方法的PCR试剂盒，其特征在于其包含权利要求1所述的上游引物SEQIDNO.1和下游引物SEQIDNO.2。

9.权利要求1所述的PCR专用引物在实时荧光定量检测GDNF剪接变异体1、3表达水平方面的应用。