[发明专利]一种类条纹鲈抗菌肽sb-M1-4

说明书

本发明涉及一种包含抗菌肽sb-Moronecidin(后简写为sb-M)保守区域IVHVGKTI-NH2的序列，我们在具有很好的抗菌活性的抗菌肽sb-M原有序列的基础上，进行人工改造设计，根据同源性比对，分析出保守序列IVHVGKTI。与hypothetical protein的保守序列KLIHRLVT进行杂合，设计，最终获得序列：FGLHIFKGLVHVGKTIHKLITG。本发明的有益效果是：本发明所述的抗菌肽，具有高效广谱抑菌作用，低毒性。可作为抗生素替代品使用。

专利申请号：

技术领域：本发明为一种类条纹鲈抗菌肽sb-M1-4。

背景技术：近年来随着抗生素的滥用，抗药菌越来越多，耐药性日益严重。据资料显示，在美国临床上分离到的金葡菌有95％对青霉素耐药，50％以上对甲氧西林耐药(Frindkin SK，Gaynes RP.Antimicrobial resistance in intensive care units.Clin Chest Med.1999，20(2)：303-316)；2012年我国临床检测发现，金葡菌和凝固酶阴性葡萄球菌中甲氧西林耐药株(MRSA和MRCNS)的检出率平均分别为47.9％和77.1％(2012年中国CHINET细菌耐药性监测Chin J Infect Chemother，2013，13(5)：321-330)。这种情况逐渐严重威胁着人类的生产生活，从而导致人们对此潜在威胁意识的觉醒及食品安全级别意识的提高，产生了替代旧抗生素且绿色环保、安全抗耐药的新一代抗生素的迫切需要。

抗菌肽是生物体内免疫防御系统的重要组成部分，是一类小分子肽，被称为安全的天然抗生素，具有抗菌谱广、无耐药性、热稳定好、水溶性高、无毒无残留等优点。据统计，目前我国尚有多达20种人畜共用或畜禽专用的抗生素作饲料添加剂，除此之外，抗菌肽还被并将被广泛用于化妆品、食品保鲜剂、药物、转基因表达等与人类生产生活当中。将抗菌肽产品开发成新的代替传统抗生素的产品，将给我国的相关行业注入一针强心剂，推动我国相关行业不断向前发展。

抗菌肽sb-M1-4序列：FGLHIFKGLVHVGKTIHKLITG；分子式：C116H187N31O25，分子量MW[AV]：2415.9；不含有稀有氨基酸和外源化学成分，具有免疫原性小、水溶性好、广谱杀菌等优点，能耐受胃肠道中蛋白酶及肽酶的降解。特别是在酸性条件下，加热甚至是高温高压处理对其抗菌活性没有影响。可以在产品保存过程中持续发挥其功能，保持产品品质，延长贮存期限。sb-M1-4可以作为新一代的添加剂，是很好的传统抗生素替代品，能有效得解决人和动物药残和病原菌耐药性的问题。

发明内容：本发明的目的在于提供一种人工构建的抗菌肽序列。我们在具有很好的抗菌活性的抗菌肽sb-M原有序列的基础上，我们对其进行人工改造设计，根据同源性比对，分析出保守序列IVHVGKTI。与抗菌肽hypothetical protein的保守序列KLIHRLVT进行杂合，设计出十种人工抗菌肽，通过筛选，最终获得序列：FGLHIFKGLVHVGKTIHKLITG。

本发明的方法包括如下步骤：

步骤(1)本发明利用生物信息学方法对抗菌体sb-M进行BLAST比对，分析并选出保守区域P1：IVHVGKTI

步骤(2)选择与其功能相近的抗菌肽hypothetical protein的保守区域P2：KLIHRLVT，与sb-M1进行杂合设计；

步骤(3)采用化学合成法合成sb-M1系列抗菌肽十组；

步骤(4)采用平板培养法对合成抗菌肽sb-M1系列设计抗菌肽进行筛选，并对效果明显的抗菌肽进行对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌DH5α、沙门氏菌、动物致病大肠杆菌和医院临床病例分离的大肠埃希菌、溶血葡萄球菌的抗菌实验如图1所示，结果显示抗菌肽sb-M1-4对以上各菌均有良好的抗菌活性。