[发明专利]一种基于功能核酸利用共振散射光谱检测17β-雌二醇的方法

权利要求书

1.一种基于功能核酸利用共振散射光谱检测17β-雌二醇方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)一个制备适配体-纳米金探针序列的步骤，所述的适配体为一段功能核苷酸序列，所述的功能核苷酸的序列为：5'-GCT-TCC-AGC-TTA-TTG-AAT-TAC-ACG-CAG-AGG-GTA-GCG-GCT-CTG-CGC-ATT-CAA-TTG-CTG-CGC-GCT-GAA-GCG-CGG-AAG-C-3'，将纳米金和所述的适配体结合，形成稳定的适配体-纳米金探针；

(2)在探针溶液中加入待检测的怀疑含有17β-雌二醇的水溶液，孵育，加入氯化钠溶液，通过测定共振散射信号强度来判断待测溶液中17β-雌二醇的含量。

2.根据权利要求1所述的基于功能核酸利用共振散射光谱检测17β-雌二醇方法，其特征在于：上述步骤(1)中，将功能核苷酸配制成1μmol/L的母液，步骤(2)中氯化钠溶液配制成浓度为2mol/L的母液。

3.根据权利要求1所述的基于功能核酸利用共振散射光谱检测17β-雌二醇方法，其特征在于所述的纳米金通过以下方法制备：在100毫升煮沸的质量百分比浓度为0.01％的氯金酸溶液中，加入3.5毫升质量百分比浓度为1％的柠檬酸三钠溶液，搅拌30分钟，移除加热装置后继续搅拌混合物10分钟，最后，使溶液达到室温并且使用0.2μm超滤膜过滤，然后储存在恒温为4℃的黑色玻璃瓶中备用。

4.根据权利要求1所述的基于功能核酸利用共振散射光谱检测17β-雌二醇方法，其特征在于，上述步骤(1)中，检测体系中功能核苷酸的终浓度为20nmol/L，使用量为1μmol/L的母液取10μL，纳米金的使用量为100μL，步骤(2)中，检测体系中氯化钠的浓度为120mM，使用量为2mol/L母液取30μL。

5.根据权利要求1所述的基于功能核酸利用共振散射光谱检测17β-雌二醇方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)一个建立已知17β-雌二醇浓度的检测体系的步骤，取至少六支分别加入10μL，1μmol/L 17β-雌二醇适配体的离心管，加入100μL纳米金溶液，充分混匀后将离心管置于25℃条件下孵育15min，然后分别加入10μL不同浓度的17β-雌二醇溶液，使得整个检测体系中17β-雌二醇的含量维持在0.1-3.0μmol/L，然后充分混匀后再将离心管置于25℃条件下孵育15min，在上述混合液中加入30μL、2mol/L的氯化钠溶液充分混匀并且采用缓冲液定容至500μL，留作以下测定用；

(2)另取1支离心管将17β-雌二醇溶液用10μL超纯水替代，按照上述步骤(1)的方法处理后作为空白对照体系溶液；

(3)分别取500μL步骤(1)和步骤(2)制备的标准溶液和空白对照液，置于石英荧光比色皿中，所述的石英荧光比色皿的内径为0.5cm×0.5cm，外径为1.0cm×1.0cm，用荧光光度计进行扫描测定信号，扫描条件为：激发光狭缝为2.5nm，发射光狭缝为2.5nm，激发光波长为550nm条件下扫描，获得其共振散射信号光谱，17β-雌二醇和空白对照液的共振散射光谱信号分别为I_550nm和(I_550nm)_b，计算相对共振散射强度值ΔI＝I_550nm-(I_550nm)_b；

(4)以不同浓度17β-雌二醇(C_E2)与对应的相对共振散射强度值ΔI作图，绘制标准曲线；

(5)制备样品检测体系：取10μL待测样品，加入到步骤(1)方法制备的检测体系离心管中，充分混匀后再将离心管置于25℃条件下孵育15min后，在混合液中加入30μL、2mol/L的氯化钠溶液充分混匀并且缓冲液定容至500μL，按步骤(3)方法测定共振散射信号并计算ΔI。

(6)根据计算所得的ΔI值，查标准曲线，可以求得样品中17β-雌二醇含量。

6.根据权利要求5所述的基于功能核酸利用共振散射光谱检测17β-雌二醇方法，其特征在于：所述的缓冲液为丙磺酸缓冲液，浓度为10mmol/L，PH值为7.0。