[发明专利]融合蛋白Nt4CL7aPcSTS及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中融合蛋白Nt4CL7aPcSTS及其制备方法与应用。

背景技术

白藜芦醇(Resveratrol，简称Res)，化学名为3，4'，5-三羟基-1，2-二苯乙烯(trans-3,4',5-trihydroxystilbene)，又称芪三酚，是一种含有芪类结构的非黄酮类多酚化合物，分子量为228.2，不溶于水，溶于乙醇等有机溶剂。天然的白藜芦醇在很多植物中存在，例如虎杖、花生和葡萄等。

白藜芦醇是植物遭遇紫外线照射、机械损伤及真菌感染时急剧增加的一种植保素，研究显示白藜芦醇具有抗癌、保护心血管、抗氧化、抗衰老、免疫调节、神经保护和植物雌激素等作用，可广泛地应用于医药、保健品、食品、化妆品等领域。白藜芦醇是葡萄酒最重要的保健成分，法国人在高脂肪、高蛋白、高能量饮食习惯下，心血管疾病的发病率远低于其他欧美国家，就得益于经常饮用含白藜芦醇的红葡萄酒。

白藜芦醇来源于苯丙烷代谢途径(Phenylpropanoid pathway)。其生物代谢途径为：苯丙氨酸在苯丙氨酸解氨酶(Phenylalanine ammonia-lyase，PAL)作用下裂解成反式肉桂酸，肉桂酸在肉桂酸-4-羟基化酶(Cinnamate-4-hydroxylase，C4H)的催化作用下生成4-香豆酸，4-香豆酸在4-香豆酰辅酶A连接酶(4-Coumarate-CoA ligase，4CL)的作用下合成4-香豆酰辅酶A，最后，芪合酶(Stilbene synthase，STS)催化1分子的4-香豆酰辅酶A和3分子的丙二酰辅酶A生成白藜芦醇(图1)。

在生物体内白藜芦醇生物合成途径限速步骤较多，单纯过量表达某一关键酶虽然对白藜芦醇的含量可能会产生一定的促进作用，但由于其它步骤限制，白藜芦醇的高水平积累非常困难。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何提高白藜芦醇的产量。

为解决上述技术问题，本发明提供了融合蛋白Nt4CL7aPcSTS。

本发明所提供的融合蛋白，名称为Nt4CL7aPcSTS，是如下⑴或⑵的蛋白质：

⑴由蛋白质Nt4CL和蛋白质PcSTS融合得到的融合蛋白：

所述蛋白质Nt4CL是如下a)或b)：

a)氨基酸序列是SEQ ID No.1第1-542位氨基酸残基的蛋白质；

b)将a)经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白质；

所述蛋白质PcSTS是如下A或B：

A、氨基酸序列是SEQ ID No.1第550-937位氨基酸残基所示的蛋白质；

B、将A经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由其衍生的蛋白质。

⑵将⑴的N端或C端连接标签得到的带标签蛋白质。

所述融合蛋白中，所述蛋白质Nt4CL和蛋白质PcSTS通过七个氨基酸残基连接。所述七个氨基酸残基的序列如SEQ ID No.1第543-549位所示，所述融合蛋白的氨基酸序列是SEQ ID No.1。

为了使所述融合蛋白Nt4CL7aPcSTS便于纯化，可在所述融合蛋白Nt4CL7aPcSTS的N端和/或C端连接上如表1所示的标签。如在SEQ ID No.1所示的蛋白质的N端和C端分别连接一个6*His标签(HHHHHH)得到的融合蛋白。

表1.标签的序列