[发明专利]疫苗佐剂及其在制备新城疫灭活疫苗中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种应用佐剂制备新城疫灭活疫苗的方法，还涉及所述方法制备得到的新城疫灭活疫苗，属于新城疫灭活疫苗的制备领域。

背景技术

佐剂(adjuvant)，又称免疫佐剂，其功能是与抗原混合后注射于动物体内，能非特异性改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发挥其辅佐作用。凡是可以增强抗原特异性免疫应答的物质均可称为佐剂。佐剂的种类非常多，常规佐剂包括铝盐类、油乳剂、蜂胶佐剂。最常见的佐剂为油类佐剂，例如弗氏佐剂、白油佐剂、MF-59、SAF等，这类佐剂通常具有良好的免疫增强作用。

目前，新城疫灭活疫苗免疫效果不理想，亟待开发一种可刺激机体产生较强的细胞免疫和体液免疫的新城疫灭活疫苗。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种应用佐剂制备新城疫灭活疫苗的方法，该方法制备的新城疫灭活疫苗可刺激机体产生较强的细胞免疫和体液免疫，延长免疫保护期。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是：

本发明公开了一种制备新城疫灭活疫苗的方法，包括以下步骤：(1)增殖新城疫病毒，收获病毒液，灭活；(2)向灭活后的病毒液中加入左旋咪唑母液，混匀，得到水相溶液；(3)向水相溶液中加入表面活性剂，混匀；(4)加入白油，乳化，即得。

其中，步骤(1)采用SPF鸡胚增殖新城疫病毒；优选的，所述新城疫病毒为新城疫病毒La Sota株；

步骤(2)所述左旋咪唑母液是左旋咪唑含量为50mg/ml的兽用盐酸左旋咪唑注射液；优选的，所述左旋咪唑母液用0.22μm滤器过滤除菌；

步骤(2)每毫升水相溶液中含有左旋咪唑2mg、5mg或10mg；优选为10mg；并调整水相溶液的pH值达中性。

例如，步骤(2)取50mg/ml的左旋咪唑母液4ml与96ml灭活病毒液混合均匀，即为每毫升溶液中含有左旋咪唑为2mg的水相溶液；取50mg/ml的左旋咪唑母液10ml与90ml灭活病毒液混合均匀，即为每毫升溶液中含有左旋咪唑为5mg的水相溶液；取50mg/ml的左旋咪唑母液20ml与80ml灭活病毒液混合均匀，即为每毫升溶液中含有左旋咪唑为10mg的水相溶液。

步骤(3)所述表面活性剂的加入量为灭活后的病毒液体积的5％；优选的，所述表面活性剂为吐温-80。

步骤(4)按体积比计，经步骤(3)处理的水相溶液与白油的比例为l：1.5。

本发明对制备新城疫灭活疫苗的佐剂进行了筛选实验，分别以左旋咪唑与弗氏佐剂、左旋咪唑与皂苷、左旋咪唑与白油、白油与卡波姆(树脂)、白油与黄芪多糖为佐剂制备新城疫灭活疫苗。结果表明，佐剂为左旋咪唑与白油制备的新城疫灭活疫苗的免疫效果最好，HI抗体水平最高，免疫后28天HI抗体平均水平达8.9log2。因此，本发明选择白油与左旋咪唑为制备灭活疫苗的佐剂，并进一步对左旋咪唑用量进行优化。结果表明，含2-10mg左旋咪唑的疫苗免疫组HI抗体平均水平高于添加其他量左旋咪唑的疫苗免疫组；而含10mg左旋咪唑的疫苗免疫组HI抗体平均水平显著高于其他组。

本发明还公开了所述方法制备得到的新城疫灭活疫苗。动物免疫试验结果表明，制备得到的新城疫灭活疫苗免疫鸡只后无局部或全身反应，安全性好；免疫后可刺激机体产生较强的细胞免疫和体液免疫；含10mg左旋咪唑的疫苗免疫组免疫后10周脾淋巴细胞中IFN-γ含量为8076.92pg/mL，具有更好的保护作用，延长疫苗免疫保护期。

本发明技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果：

(1)本发明制备的新城疫灭活疫苗，免疫鸡只后无局部或全身反应，安全性好；

(2)本发明制备的新城疫灭活疫苗免疫鸡只后，可刺激机体产生较强的细胞免疫和体液免疫，具有更好的保护作用，延长疫苗免疫保护期。

本发明所涉及到的术语定义

除非另外定义，否则本文所用的所有技术及科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。