[发明专利]一种特异性检测2型有蹄类博卡细小病毒的引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.一种特异性检测 2 型有蹄类博卡细小病毒的荧光探针，其特征在于，探针 PboVP1 的序列如 SEQ ID NO.3 所示 ；所述探针的 5′端标记有荧光报告基团，3′端标记有荧光淬灭基团。

2.根据权利要求 1 所述的荧光探针，其特征在于，所述 3′端标记有带有小沟结合物 MGB 的不发光的荧光淬灭基团。

3.根据权利要求 2 所述的荧光探针，其特征在于，所述荧光报告基团为选自 FAM、VIC、HEX、JOE、NED、TAMRA、CY3、ROX 或 CY5 中的任意一种。

4.一种特异性检测 2 型有蹄类博卡细小病毒的实时荧光定量检测试剂盒，其特征在于，含有引物对和权利要求 2 - 3 所述的荧光探针；所述引物对包括上游引物和下游引物，所述上游引物 PboVF1 的核苷酸序列如 SEQ ID NO.1 所示，下游引物 PBoVR1 的核苷酸序列如 SEQ ID NO.2 所示。

5.根据权利要求 4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的反应体系为 ：20μL 反应体系的具体配置为 10×PCR 反应缓冲液 2μL，50mM 镁离子 1μL，2.5mM dNTPs 混合溶液2μL，10μM PboVF1 0.5μL，10μM PboVR1 0.5μL，10μM PboV P1 0.5μL，5 u /μL 的 Taq 酶 0.2μL，待测样品 DNA 模板 10— 50ng 以及余量的纯水。

6.根据权利要求 5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的荧光定量 PCR扩增条件为 ：95℃，5min ；95℃，10s ；60℃，40s，共做 40 个循环，然后终止。

7.根据权利要求 4~6 任一项所述的试剂盒，其特征在于 ：包括顶部敞口的矩形盒体以及覆盖在盒体顶部的顶盖，其特征在于 ：所述盒体中设有多个可拆卸的固定带 ；所述固定带平行于所述盒体的底部 ；所述固定带上设有 至少一个用于固定试剂的固定孔 ；所述固定带和盒体的底部之间设有防震组件 ；所述防震组件包括柔性垫板、设置在柔性垫板下方的空腔层以及设置在空腔层下的缓冲室 ；

所述空腔层包括多个交错设置的三棱柱型空腔 ；所述缓冲室的底部的边缘设有多个可转动的连杆，连杆的末端与空腔层的底部铰接 ；所述空腔层的底部的中心还设有多个缓冲弹簧 ；所述顶盖和盒体通过密封组件连接 ；所述密封组件包括环绕在盒体顶部外侧的环形突起以及设置在顶盖内侧、与突台配合的凹槽 ；所述凹槽表面覆盖有弹性密封层 ；所述突台的截面为半圆形 ；所述顶盖的底部设有突出的压紧弧面 ；所述柔性垫板顶部设有与所述固定孔对应的固定槽 ；所述固定带和顶盖间设有防震层，所述防震层上设有与固定孔对应的防震通道 ；所述盒体的内侧设有多个突台，所述固定带横架在突台上。