[发明专利]脂环酸芽孢杆菌金标测试条及其制备方法

权利要求书

1.脂环酸芽孢杆菌金标测试条，包括衬板（7），其特征在于：所述衬板（7）上附有双面胶层（8），其一端设有手持端吸水层（1），其另一端设有测试端吸水层（4）；所述手持端吸水层（1）与所述测试端吸水层（4）之间的所述衬板（7）上依次设有检测层（2）、抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层（3）；所述检测层（2）的一端与所述手持端吸水层（1）相粘附，其另一端则与所述抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层（3）相粘附，该抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层（3）与所述测试端吸水层（4）相粘附；所述检测层（2）上沿样品流动方向依次设有检测线（6）、控制线（5）；所述手持端吸水层（1）与所述测试端吸水层（4）上均设有单面胶保护层（9）。

2.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于：所述手持端吸水层（1）由多层滤纸制成。

3.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于：所述测试端吸水层（4）由无纺布制成。

4.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于：所述检测线（6）为以线形包被纯化的抗脂环酸芽孢杆菌单抗。

5.如权利要求4所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于：所述抗脂环酸芽孢杆菌单抗是通过下述步骤制得：采用常规技术将来自于脂环酸芽孢杆菌模式菌株ATCC 49025免疫接种Balb/C小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞融合，选择产生所需抗脂环酸芽孢杆菌单克隆抗体的杂交瘤细胞；再将杂交瘤细胞克隆得单克隆抗体。

6.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于：所述控制线（5）为以线形包被纯化的羊抗鼠IgG抗体。

7.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条，其特征在于：所述检测层（2）由纤维素膜制成。

8.如权利要求1所述的脂环酸芽孢杆菌金标测试条的制备方法，包括以下步骤：

⑴制备胶体金：

在质量浓度为0.01~0.03%的氯金酸中加入其体积0.8~1%且浓度为1%的柠檬酸三钠，煮沸10~20分钟，还原制成15~50纳米的胶体金溶液；

⑵制备抗脂环酸芽孢杆菌胶体金溶液：

在100ml所述胶体金溶液中加入2~10mg抗脂环酸芽孢杆菌抗体，混合均匀后以2000转/分的速率离心10min，得到上清液，该上清液再以10000转/分的速率离心1h，得到沉淀物；将1000ml所述沉淀物溶于4~10ml  0.02M、pH=7.4的Tris-HCl液中，得到含0.1~0.6%动物血清白蛋白、0.02%叠氮钠的抗脂环酸芽孢杆菌抗体的胶体金溶液；所述抗脂环酸芽孢杆菌抗体是指抗脂环酸芽孢杆菌单抗；

⑶将所述抗脂环酸芽孢杆菌胶体金溶液浸着无纺布，浸入量以浸入液体开始向外流出为止，然后在37℃下干燥至恒重，即得抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层（3）；

⑷制备检测层（2）：

将浓度为1~2mg/ml的抗脂环酸芽孢杆菌单抗和浓度为1~2mg/ml的羊抗鼠IgG抗体喷在纤维素膜上形成检测线（6）和控制线（5），最后在37℃下干燥至恒重，即得检测层（2）；

⑸在附有双面胶层（8）的塑料制成的衬板（7）的中段粘贴所述检测层（2），该衬板（7）的两端分别黏贴多层滤纸制成的手持端吸水层（1）和无纺布制成的测试端吸水层（4）；然后在所述测试端吸水层（4）与所述检测层（2）之间夹贴所述抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层（3），其中该抗脂环酸芽孢杆菌金标抗体层（3）的4/5部分夹在所述测试端吸水层（4），1/5部分压在所述检测层（2）上；最后，在所述手持端吸水层（1）和所述测试端吸水层（4）上附上单面胶保护层（9），即得。