[发明专利]靶向HSV-1病毒UL18基因的小干扰RNA及应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，特别涉及靶向HSV-1病毒UL18基因的小干扰RNA分子(siRNA)及应用。

背景技术

单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV)属于疱疹病毒科、α疱疹病毒亚科，是一种以人类为唯一自然宿主的双链包膜DNA病毒，血清学分为HSV-1和HSV-2型。HSV-1在形成局部的疱疹病损后，常常以各种方式进一步引起机体神经系统的感染。尤其重要的是在感染神经系统的过程中，疱疹病毒能够发挥其生存技巧中最令人叫绝的方式：-潜伏-再激活-这个在进化中形成的生物学优势，使得HSV-1能够在很大程度上避开宿主免疫系统的攻击，从而在机体内长期甚至终生停留。HSV-1感染性疾病常反复发作，迁延难愈，给病人造成极大痛苦。目前，药物治疗是治疗HSV感染的主要手段。临床常用的治疗药物主要是无环鸟苷等核苷类及其类似物，如阿昔洛韦(Acyclovir，ACV)、伐昔洛韦等。其作用靶点是病毒DNA聚合酶，抑制病毒的复制。肝素可与病毒膜表面糖蛋白结合；化合物SCH 43478及其类似物抑制HSV的立即早期基因的表达；硫脲抑制剂WAY-150138可抑制UL6参与衣壳组装，抑制子代病毒DNA包装进入衣壳结构。但部分核苷类似物如碘脱氧尿苷、更昔洛韦等具有诱变性，安全性低，并且在上世纪80年代ACV耐药株即已出现，而且随着抗疱疹病毒药物的广泛使用，关于耐药株的报道也越来越多。所以，寻找新的抗疱疹病毒的治疗方法和治疗靶点成为科研工作者的研发目标。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)介导的特异性基因表达沉默现象。在细胞内，dsRNA被核糖核酸酶(又称Dicer)剪切成短的dsRNA(21～25nt)，这种小的dsRNA被称作siRNA。siRNA中的反义链与多种核酸酶形成复合体称作RISC复合体。随后RISC复合体被激活成为活性状态(RISC*)。siRNA的正义链引导RISC*到沉默靶点，RISC*与沉默靶点mRNA结合，在ATP的存在下，mRNA与siRNA的反义链结合互补，引发核酸酶将mRNA剪切成为21～23nt的小片段，继而阻止mRNA的表达翻译，导致目的基因的沉默。已有研究表明siRNA作为高效特异的抗病毒药物具有极大的发展前景，siRNA在HIV-1，SARS病毒，呼吸道综合症病毒等多种病毒的治疗研究中被成功应用。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供靶向HSV-1病毒UL18基因的小干扰RNA分子(siRNA)及其修饰物。解决了现有HSV-1感染治疗方案中存在的药物毒性大、易产生耐药性，易复发等缺陷和问题，制得靶向明确，安全可靠，效果明显的抗HSV-1病毒感染的新型药品。

本发明的另一目的在于提供靶向HSV-1病毒UL18基因的siRNA的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：靶向HSV-1病毒UL18基因的siRNA，所述的siRNA为siRNA181、siRNA182或siRNA183中的一种或至少两种：

siRNA181：正义链：5'-CUCAACGUGCUGUACUACAAC-3'；

反义链：5'-UGUAGUACAGCACGUUGAGGU-3'；

siRNA182：正义链：5'-CCACCAUCAUCCUUACGCUAA-3'；

反义链：5'-AGCGUAAGGAUGAUGGUGGUU-3'；

siRNA183：正义链：5'-CCCGUUAUACGCUAUCCCUAA-3'；

反义链：5'-AGGGAUAGCGUAUAACGGGGG-3'；

siRNA N.C：正义链：5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3'；

反义链：5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3'；

其中，siRNA N.C为siRNA阴性对照，其3'端的TT碱基是悬垂序列，是为了增加siRNA在细胞内的稳定性。