[发明专利]肉桂快速分子鉴定方法

说明书

技术领域

本发明属于中药材来源品种鉴定技术领域，具体涉及用特异的SNP鉴定肉桂的方法。

背景技术

肉桂Cinnamomi Cortex为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥树皮。肉桂的嫩枝(桂枝)亦供药用，为《中华人民共和国药典》2010年版收载品种。历代本草中肉桂均列为上品，认为其有补火助阳，引火归源，散寒止痛，活血通经等作用。2002年，中华人民共和国卫生部公布《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中，对药食同源物品做出了具体规定，其中肉桂被列入既是食品又是药品的物品名单。肉桂作为餐桌上常见的调味品，也是常见的食品添加剂和香料。在工业生产中，肉桂因其桂皮酸等物质含量丰富，常作为化妆品，香皂，杀虫剂等的添加剂和矫味剂的主要来源。樟科植物肉桂是药典中肉桂药材的唯一来源，近年来，市场上常出现以肉桂同科植物阴香C.burmanni Blume等冒充肉桂出售的情况，在外观形状颜色及气味等各方面特征与肉桂相似，容易造成混用现象。柴桂C.tamala Nees et Eberm，Gamble大叶桂C.iners Reinw.ex Bl，Miq.，天竺桂C.japonicum Sieb等常作为肉桂的替代品，一般不做正品使用。锡兰肉桂C.zeylanicum B1.Bijdr.，亦称斯里兰卡桂，原产斯里兰卡，是一种古老名贵的香料植物，在我国海南、广东、广西和云南等地有种植。美国市场上习惯以锡兰肉桂作为原料。国内部分饮料，及名贵香烟中也有加入锡兰肉桂的提取物如丁香酚等。因此，对肉桂及其近缘物种进行准确鉴定是规范用药，保障肉桂类食品安全规范的必要步骤。

发明内容

本发明第一个目的在于提供肉桂快速鉴定用SNP。

本发明第二个目的在于提供肉桂快速鉴定用SNP在肉桂鉴定用的应用。

本发明第三个目的在于提供肉桂快速鉴定方法

本发明提供的肉桂快速鉴定鉴定用SNP，自核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，其中，SEQ ID No.1所示序列的5’端起第80位为T或C。

本发明提供的SNP可用于鉴定肉桂，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第80位为T，则鉴定为肉桂；如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第80位为C，则鉴定为不是肉桂。

本发明提供的肉桂快速鉴定方法，其包括如下步骤：

1)以待测样品DNA为模板，扩增含有SEQ ID No.1所示序列的片段；

2)对扩增产物进行测序，拼接后去除序列两端psbA和trnH基因区，获得psbA-trnH基因间隔区，通过分析SEQ ID No.1所示的序列，确定自SEQ ID No.1所示序列的5’端起80位的碱基情况。

其中，如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第80位为T，278-279无缺失，则鉴定为肉桂；如果自SEQ ID No.1所示序列的5’端起第80位为C，则鉴定为不是肉桂。

本发明方法适用性更广，能检测所有能提取出DNA的肉桂任何样品。因此，能够实现肉桂原植物与近缘种、药材、生饮片、粉末与混淆品的快速、准确鉴定。

附图说明

图1所示为psbA-trnH序列的扩增结果，其中1-21为肉桂，22-33为阴香，34-36为大叶桂，37-39为川桂，40-42为锡兰肉桂，43-45为天竺桂，46-48为香桂，49-51为柴桂，CK为阴性对照

图2所示为肉桂和其他物种psbA-trnH序列的比对结果。其中，从5’端起第80位，肉桂为T，其他物种为C。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

1)从不同产地收集的27份肉桂和37份其他物种样品，分别取35mg药材，在MM400球磨仪(德国Retsch)上进行研磨，用植物基因组DNA提取试剂盒(Tiangen Biotech Co.，China)提取总DNA。

表1 肉桂和其近缘种及混伪品样品

2)PCR扩增

引物序列为psbA：5′-GTTATGCATGAACGTAATGCTC-3′，trnH：5′-CGCGCATGGTGGATTCACAATCC-3′由生工生物工程公司有限公司(北京)合成。引物用无菌去离子溶解并稀释至2μmol/μL。