[发明专利]一种抗肿瘤肽变体NC8及其应用

说明书

相关申请

    本申请是专利申请号为201410312285.2、名称为“一种抗肿瘤肽变体及其应用”的分案申请。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体地说，本发明涉及抗肿瘤肽变体。

背景技术

ND100是由1Ala、1Glu、1Gly、1Leu、2Pro、1Thr、1Tyr组成的八肽。体外及体内试验均表明ND100具有明显的抑制肿瘤细胞生长的作用，可用来制备抗肿瘤药物，用于治疗肿瘤。

在现有技术中，为了提高多肽的活性，针对多肽序列进行特异性的改变，从而寻找活性更高的变体是常规的做法。为了进一步提高该多肽的生物活性，申请人通过大量的实验，针对多肽序列进行了氨基酸的改变，从而获得了比原始多肽本身具有更高抑制活性的变体。

发明内容

本发明涉及的多肽，序列如下:

NC：   AlaGluGlyLeuProProThrTyr；

（NC1）：AlaGluGlyLeuProProThrIle；

（NC2）：AlaSerGlyLeuProProThrTyr；

（NC3）：AlaGluGlyLeuProSerThrTyr；

（NC4）：AlaGluGlyGlyLeuProProThrTyr；

（NC5）：AlaGluGlyGlyLeuProProProThrTyr；

（NC 6）：GlyAlaGluGlyLeuProProProThrTyr；

（NC7）：AlaGlyGlyLeuProProThrTyr；

（NC8）：GlyAlaGlyGlyLeuProProThrTyr；

（NC 9）：AlaGlyGlyLeuProSerThrTyr；

（NC 10）：GlyAlaGlyGlyLeuProSerThrTyr；

（NC 11）：GlyAlaGlyGlyLeuProProProThrTyr；

（NC 12）：AlaGlyGlyLeuProProProThrTyr；

（NC 13）：AlaGlyGlyLeuProProProThrIle；

对照1：AlaGluGlyLeuProGlyThrTyr；

对照2：AlaLeuGlyLeuProProThrTyr；

本发明的多肽合成后，可以做成游离态形式，也可以做成阳离子盐，如：TFA盐(三氟乙酸盐)，HCl盐(盐酸盐)，醋酸盐形式。

本发明的多肽，可以选择和一种或多种药物载体组合，制成多种药物剂型，用于治疗。这些药物剂型涵盖：注射溶液、片剂、霜剂、胶囊、软膏、洗剂、舌含片等剂型局部或全身给药。

具体实施方式

实施例1：本发明多肽的人工化学合成

本发明的肽的制备采用液相合成法和活化酯逐个增长法，将本发明的肽的C端的第二个氨基酸的氨基用Boc基(叔丁氧羰酰基)保护，羧基用HOSu(N-羟基琥珀酰亚胺)活化，然后在KHCO₃溶液中与C端第一个氨基酸在30℃水浴，反应2天。抽去有机溶剂，在冰浴中用2mol/LHCl调pH3～4(沉淀最多时)，用乙酸乙酯抽提，饱和NaCl洗3次，无水Na₂SO₄干燥，抽干，无水乙醚研磨，得带保护基的二肽。用50％TFA(三氟醋酸)处理，脱去Boc基，再与N端带Boc保护基，C端用HOSu活化的C端的第三个氨基酸缩合，用同样的方法逐个接上氨基酸，最后用催化氢化法脱去Glu侧链上的保护基，用50％TFA脱去本发明肽N端的Boc基，得粗肽，粗肽用HPLC进行分离纯化，可得98％纯度的本发明的多肽。经过电喷雾质谱测定，其序列与目标序列完全一致。

实施例2：ND100的抗肿瘤活性

(1)体外活性测定：

采用细胞培养和细胞计数的方法，人肝癌细胞7721、胃癌细胞MKN、肺癌细胞A549以各自常规的培养基，视不同情况加入10％左右的小牛血清， 用T-25培养瓶在37℃，5％CO2培养箱中单层培养。