[发明专利]大黄鱼白细胞介素8基因大肠杆菌表达产物及制备与应用

说明书

技术领域

本发明涉及大黄鱼白细胞介素8(IL-8)基因，尤其是涉及一种大黄鱼白细胞介素8基因大肠杆菌表达产物及其制备方法与应用。

背景技术

趋化因子属于细胞因子家族，在炎症反应或正常生理条件下调控免疫细胞的迁移，调控所富集细胞的免疫反应和分化，是先天性免疫和获得性免疫反应之间的桥梁(Esche C,Stellato C,Beck LA.Chemokines:key players in innate and adaptive immunity[J].J Invest Dermatol,2005,125(4):615-628)。趋化因子还可以调控免疫细胞在淋巴器官间的定位和分化、血管生成、神经系统发育、器官生成以及生殖细胞迁移等(DeVries ME,Kelvin AA,Xu L,Ran L,Robinson J,Kelvin DJ.Defining the origins and evolution of the chemokine/chemokine receptor system[J].J Immunol,2006,176(1):401-415)。根据前两个保守的半胱氨酸残基的排列将趋化因子分为四个亚家族：CXC型、CC型、CX3C型和C型。

白细胞介素8(Interleukin-8，IL-8)属于CXC型趋化因子，是鱼类中功能试验进展较多的一个趋化因子。IL-8不仅可以趋化嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、静息T细胞和刺激后的嗜酸性粒细胞，而且可以通过诱导呼吸爆发、胞吐等作用活化这些细胞(van der Aa LM,Chadzinska M,Tijhaar E,Boudinot P,Verburg-van Kemenade BM.CXCL8chemokines in teleost fish:two lineages with distinct expression profiles during early phases of inflammation[J].PloS one.2010，5:e12384)。虹鳟的IL-8重组蛋白体外可以趋化中性粒细胞，并且像哺乳动物一样，并能引起目的细胞呼吸爆发反应(Harun NO,Zou J,Zhang YA,Nie P,Secombes CJ.The biological effects of rainbow trout(Oncorhynchus mykiss)recombinant interleukin-8[J].Dev Comp Immunol,2008,32(6):673-681)。此外，IL-8还可以诱导CC型趋化因子如CK-6以及促炎症因子IL-1β、TNF-α的表达。

发明内容

本发明的第一目的在于提供可高效表达大黄鱼白细胞介素8基因的大肠杆菌工程菌。

本发明的第二目的在于提供大黄鱼白细胞介素8基因大肠杆菌表达产物及其制备方法。

本发明的第三目的在于提供大黄鱼白细胞介素8重组蛋白的应用。

所述可高效表达大黄鱼白细胞介素8基因的大肠杆菌工程菌为大肠杆菌(Escherichia coli)BL21/pET-His-IL-8，已于2015年1月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏中心的地址为中国，武汉，武汉大学，邮编：430072，保藏编号为CCTCC NO：M 2015053。

所述大黄鱼白细胞介素8基因大肠杆菌表达产物为分子量约10kDa(kilodalton，千道尔顿)的大黄鱼IL-8重组蛋白，该大黄鱼IL-8重组蛋白在终浓度为100μg/mL时，对大黄鱼外周血白细胞具有较为明显的趋化作用，并具有诱导大黄鱼外周血白细胞产生呼吸爆发的活性，显示出其在水产免疫增强剂研发中的良好应用前景。

所述大黄鱼白细胞介素8基因的cDNA序列及推断的氨基酸序列如下：

其中，下划线部分为预测的大黄鱼IL-8信号肽；阴影部分标示推断的大黄鱼IL-8成熟肽序列；星号表示终止密码子。

所述大黄鱼白细胞介素8基因大肠杆菌表达产物的制备方法，包括以下步骤：

1)克隆大黄鱼IL-8基因全长cDNA序列，再采用PCR技术扩增出编码第23～99位氨基酸的大黄鱼IL-8成熟肽基因片段；

2)将步骤1)得到的大黄鱼IL-8成熟肽基因片段克隆到大肠杆菌表达载体pET-His，得到含大黄鱼IL-8基因片段的重组表达载体pET-His-IL-8；