[发明专利]基于纳米金催化显色体系的pH及尿素的测定方法

权利要求书

1.一种基于纳米金催化显色体系的pH测定方法，其特征是将不同pH的浓度为10 mmoL/L的磷酸缓冲液、质量分数为30%的过氧化氢、浓度为16 mmoL/L的 3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐与纳米金溶液按体积比为13：4：1：2混合，37°C温浴10分钟后，立即加入0.2 mL、体积分数为 20%的硫酸溶液终止反应，目视观察颜色特征或测定吸光度值A₄₅₀，当目视观察颜色特征时，随着pH的增大，显色体系的颜色逐渐由深黄色变为淡黄色；当测定吸光度值A₄₅₀时，随着pH的增大而吸光度值A₄₅₀逐渐减小，在6.40~6.60 的pH值范围内吸光度值A₄₅₀与pH呈线性关系；所使用的纳米金采用柠檬酸三钠还原法制得：1毫升0.1 g/L的氯金酸溶液溶解于100毫升水中，回流加热煮沸后迅速加入3毫升0.1 g/L的柠檬酸三钠溶液，反应溶液由从浅黄色变成酒红色，继续回流15分钟后，将反应溶液慢慢冷却至室温，所得的纳米金粒径为13 nm，浓度为3.1 nmoL/L，4 °C保存。

2.根据权利要求1所述的基于纳米金催化显色体系的pH测定方法，其特征是所述磷酸缓冲液、过氧化氢、3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐与纳米金溶液混合后的总体积为1 mL。

3.一种基于纳米金催化显色体系的尿素测定方法，其特征是将脲酶溶液加入到0.6 mL含不同浓度尿素的浓度为10 mmoL/L，pH=6.40的磷酸缓冲液中，摇匀后37°C温浴30分钟，反应结束后，加入0.2 mL质量分数为 30%的过氧化氢溶液、0.05 mL浓度为16 mmoL/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液和0.10 mL纳米金溶液，混合均匀后37°C温浴10分钟，立即加入0.2 mL 体积分数为20%的硫酸溶液终止反应，测定吸光度值A₄₅₀，随着尿素浓度的增大显色体系的A₄₅₀值逐渐减小，在0.02~0.4 mmoL/L浓度范围内，显色体系的A₄₅₀值与尿素浓度呈线性关系，检测限为0.005 mmoL/L；所使用的纳米金采用柠檬酸三钠还原法制得：1毫升0.1 g/L的氯金酸溶液溶解于100毫升水中，回流加热煮沸后迅速加入3毫升0.1 g/L的柠檬酸三钠溶液，反应溶液由从浅黄色变成酒红色，继续回流15分钟后，将反应溶液慢慢冷却至室温，所得的纳米金粒径为13 nm，浓度为3.1 nmoL/L，4 °C保存。

4.根据权利要求3所述的基于纳米金催化显色体系的尿素测定方法，其特征是所使用的脲酶溶液的体积为0.05 mL，浓度为18 U/mL。

5.一种基于纳米金催化显色体系的人尿液中尿素测定方法，包括如下步骤：取新鲜人尿液，调节pH至6.40后，用10 mmoL/L，pH=6.40的磷酸缓冲液稀释400倍，取0.1 mL稀释液加入到0.5 mL浓度为10 mmoL/L，pH=6.40的磷酸缓冲液中，再加入0.05 mL 18 U/mL的脲酶溶液，摇匀后37°C温浴30分钟，反应结束后，加入0.2 mL质量分数为 30%的过氧化氢溶液、0.05 mL浓度为16 mmoL/L的3,3’,5,5’-四甲基联苯胺盐酸盐溶液和0.10 mL纳米金溶液，混合均匀后37°C温浴10分钟，立即加入0.2 mL体积分数为 20%的硫酸溶液终止反应，测定吸光度值A₄₅₀，通过标准曲线进行定量，获得尿液中的尿素含量。

6.根据权利要求5所述的基于纳米金催化显色体系的人尿液中尿素测定方法，其特征是所使用的纳米金采用柠檬酸三钠还原法制得：1毫升0.1 g/L的氯金酸溶液溶解于100毫升水中，回流加热煮沸后迅速加入3毫升0.1 g/L的柠檬酸三钠溶液，反应溶液由从浅黄色变成酒红色，继续回流15分钟后，将反应溶液慢慢冷却至室温，所得的纳米金粒径为13 nm，浓度为3.1 nmoL/L，4 °C保存。