[发明专利]一种定量测定五羟色胺的方法

权利要求书

1.一种定量测定五羟色胺的方法，其特征在于，过程包括：

(1)碳纤维超微电极经清洗后用循环伏安法活化，再用超纯水清洗，得到活化后洁净的碳纤维超微电极，记为洁净电极；

(2)采用双电极系统，所有电位均以Ag/AgCl作为参比电极，洁净电极和经火焰灼烧活化的该洁净电极为工作电极，铁氰化钾水溶液或多巴胺水溶液为基准溶液，梯度浓度的五羟色胺溶液作为标准溶液，采用差分脉冲伏安法进行检测；

A、首先取一根洁净电极在基准溶液中扫描，记录峰电流作为基准电流；洁净电极用超纯水清洗晾干，再在任一浓度五羟色胺标准样品中扫描，记录氧化峰电流；

B、测试完该浓度五羟色胺的洁净电极用超纯水清洗晾干，火焰灼烧进行活化后再在基准溶液中扫描，记录峰电流，然后将电极清洗晾干，在另一浓度五羟色胺标准样品中扫描，记录氧化峰电流；

重复B步骤至完成全部五羟色胺标准样品的测试；

(3)以各次经火焰灼烧活化后的洁净电极在基准溶液中的峰电流与基准电流的比值为电流校正因子，各梯度浓度五羟色胺溶液中氧化峰电流除以该浓度五羟色胺检测时对应的校正因子为校正后五羟色胺溶液中氧化峰电流；

以五羟色胺浓度和校正后五羟色胺溶液中氧化峰电流绘制成标准曲线，进而得到相应的线性回归方程；

(4)取待测样品去除其中的细胞和蛋白后，步骤(2)的电极用超纯水清洗晾干，火焰灼烧进行活化后在基准溶液中扫描，记录峰电流，然后将电极清洗晾干，在待测样品中扫描，记录氧化峰电流；峰电流与基准电流的比值为电流校正因子，氧化峰电流除以该电流校正因子为校正后氧化峰电流，将校正后氧化峰电流值带入线性回归方程中，得到待测样品中五羟色胺的浓度。

2.根据权利要求1所述的定量测定五羟色胺的方法，其特征在于，步骤(2)的差分脉冲伏安法中，初始电位0.2V、终止电位0.7V、电位增量0.004V、振幅0.05V、脉冲宽度0.1s、采样宽度0.0167s、脉冲周期0.2s，支持电解质为20mmol/L、pH值7.2的Tris-HCl缓冲溶液。

3.根据权利要求1所述的定量测定五羟色胺的方法，其特征在于，碳纤维超微电极的制备方法为：将洁净的玻璃毛细管一端拉制成内径18～22μm的尖端；碳纤维依次用丙酮、乙醇和二次蒸馏水超声清洗后在空气中晾干；将碳纤维和铜丝用碳粉导电胶粘连，将碳纤维从玻璃毛细管另一端穿入至露出玻璃毛细管尖端外，毛细管另一端用环氧树脂密封，环氧树脂固化后固定铜丝；将带有碳纤维的毛细管尖端置于750～850℃的火焰下灼烧至毛细管尖端熔融将碳纤维密封于其中；再将经熔融密封的碳纤维靠向340～360℃的火焰至黑色背景下观察到碳纤维尖端微红时立即拿开，获得碳纤维超微电极。

4.根据权利要求1所述的定量测定五羟色胺的方法，其特征在于，铁氰化钾水溶液中铁氰化钾的摩尔浓度为1.0×10^-3mol/L，多巴胺水溶液中多巴胺的摩尔浓度为1.0×10^-4mol/L。

5.根据权利要求1所述的定量测定五羟色胺的方法，其特征在于，梯度浓度五羟色胺溶液的五羟色胺浓度在1.0×10^-6～2.0×10^-4mol/L范围内。

6.根据权利要求1所述的定量测定五羟色胺的方法，其特征在于，五羟色胺溶液由1×10^-2mol/L五羟色胺母液经pH值7.2的Tris-HCl稀释配制。