[发明专利]一株蜡样芽孢杆菌J19及其诱导培养基和应用

说明书

技术领域

 本发明属于微生物发酵和应用领域，具体涉及一株蜡样芽孢杆菌J19及其诱导培养基和应用。

背景技术

自2009年开始中国对虾养殖业受到了早期死亡综合症（EMS）的重创，2011年上半年，海南、福建、广东和广西部分地区的该病导致的死亡损失高达80%，至2013年中国华南多个养殖区一造虾40头/斤规格养成率只有5-10%，中造虾多数虾塘放苗10-20天出现排塘现象，发病速度之快、范围之广更甚于一造虾。EMS主要的病因为高致病性副溶血弧菌、藻毒素和不良环境因子，常规的抗生素、消毒剂等杀菌药物对该病效果不佳。采用生物防控手段控制水体中菌相平衡逐渐成为预防和治疗EMS的新途径。将有抑菌作用又无安全隐患的芽孢杆菌发酵液用在养殖水体中，可部分或完全替代抗生素的使用，不易产生耐药性，且对环境无二次污染。芽孢杆菌作为生防制剂主要是由于其抗菌作用强而有力，但并不是所有的生防菌都能产生抗菌物质。

发明内容

本发明提供了一株蜡样芽孢杆菌J19及其诱导培养基和应用，利用本发明所述的蜡样芽孢杆菌J19及其对应的诱导培养基可以获得对副溶血弧菌有抑菌活性的活性物质，可显著降低水体中副溶血弧菌含量。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一株蜡样芽孢杆菌J19，其分类命名为蜡样芽孢杆菌 Bacillus cereus，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其保藏编号为：CGMCC No.10052。

诱导所述的蜡样芽孢杆菌J19产生对副溶血弧菌的抑菌活性物质的诱导培养基，所述诱导培养基包括以下组分，以质量比计：

葡萄糖0.1%~1%；

豆粕粉2.0%~4.0%，所述豆粕粉使用前需要在水浴中用中性蛋白酶酶解；

酵母粉0.5%~1%；

氯化钠0.1%~1%；

玉米浆0.1%~1.0%。

对上述技术方案的进一步改进：所述豆粕粉使用前需用中性蛋白酶预酶解2-3h，中性蛋白酶的用量为1500U/g豆粕粉，酶解温度为40℃。

对上述技术方案的进一步改进：它包括以下组分：葡萄糖0.1%、豆粕粉2.0%、酵母粉0.5%、氯化钠0.2%、玉米浆1.0%，余量为水。

本发明还提供了所述的诱导培养基在诱导蜡样芽孢杆菌J19产生对副溶血弧菌的抑菌活性物质中的应用。

对上述技术方案的进一步改进：所述蜡样芽孢杆菌J19在诱导培养基上于30℃下摇床培养12-16h获得蜡样芽孢杆菌J19发酵液。

对上述技术方案的进一步改进：将所述发酵液撒于水体中，发酵液用量为1.2~1.8ml/m³水体，所述发酵液中的抑菌活性物质的浓度为10±0.2mg/L。

对上述技术方案的进一步改进：所述水体的pH 8.5，盐度8‰-10‰，温度27℃-29℃。

本发明的优点和技术效果是：本发明首先筛选到一株蜡样芽孢杆菌J19，并进而通过实验获得了其诱导培养基配方，所述培养基可以诱导蜡样芽孢杆菌J19产生抑制副溶血弧菌的活性，有效降低水产养殖环境中致病性副溶血弧菌的数量，且对G⁺细菌无抑制作用，避免了抗生素在使用过程中带来的微生态破坏和细菌的耐药性，采用本发明生产的蜡样芽孢杆菌J19发酵液，降低了因弧菌过度繁殖带来的养殖动物的患病和死亡风险，进而有效解决近些年水产养殖过程中因高密度养殖、水环境污染、抗生素过量使用等因素造成的致病性弧菌大量繁殖、养成率非常低的问题，以生物制剂部分或完全替代抗生素的使用，以生物防控的手段达到控制致病性弧菌过度繁殖的目的。

附图说明

图1是本发明中2216E平板上对副溶血弧菌的抑菌圈。

图2是本发明中不同发酵时间的抑菌效果测定。

具体实施方式

本发明结合以下具体实施例对本发明作进一步详细说明。

实施例1、蜡样芽孢杆菌J19菌株的获得

2010年11月由发明人采集威海市乳山市海阳所镇某海参养殖区底泥，在实验室进行富集、分离获得一株蜡样芽孢杆菌，实验室编号为J19，即本发明所述蜡样芽孢杆菌J19。