[发明专利]一种提高渔用疫苗浸泡免疫效果的佐剂及其应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及渔用疫苗的施用途径及应用效果，具体是提高渔用疫苗浸泡免疫效果的佐剂及其应用方法。

背景技术

我国是淡水养殖大国，集约化程度高，水产病害也较为严重。疫苗是预防疾病的有效手段，能刺激动物机体产生抗体，可使鱼类特异抵御病原的攻击，在提高鱼类特异性免疫水平的同时亦能增强机体抗不良应激的能力，作为符合环境友好和可持续发展战略的病害防控措施，已成为国际现代水产养殖业的标准生产规范内容之一。渔用疫苗在浸泡免疫过程中，细菌抗原需要克服鱼类体表黏液、鳞片及皮肤的障碍，才能进入机体，效果差。目前国内商品化的渔用疫苗（嗜水气单胞菌败血症灭活疫苗、草鱼出血病活疫苗）均以注射免疫途径为主。渔用疫苗注射投递的免疫效果好，但成本高、劳动强度大，适合工厂化养殖中应用，不适合在我国池塘、网箱养殖鱼中应用，而浸泡免疫操作方便，尤其适用于小规格鱼种在分塘、运输等过程中免疫。如何提高鳃和皮肤对抗原的摄入量，是建立浸泡投递技术的首要问题。利用免疫佐剂、细胞渗透剂等材料，结合高渗浸泡、超声波处理等透皮方法，增强鱼体对抗原的摄入量，从而提高免疫效果是浸泡免疫的发展方向和趋势。基于此，开发应用高效、安全、使用方便、环境友好的提高浸泡疫苗免疫效果的浸泡材料，可大大推动渔用疫苗的应用，进而推动水产养殖业的健康发展。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提高渔用疫苗浸泡免疫效果的佐剂及其应用方法。

本发明所采取的技术方案是：

蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷在制备渔用疫苗浸泡疫苗佐剂中的应用。

一种渔用浸泡疫苗的佐剂，该佐剂由以下质量份数的成分组成：1～20份蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷、0～10份氮酮、0～30份山莨菪碱。

进一步的，上述佐剂由以下质量份数的成分组成：10份蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷、5份氮酮、15份山莨菪碱。

进一步的，上述蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷的制备方法为：先将蓖麻油先经浓硫酸酸化脱水，再与聚乙二醇400进行酯化反应生成蓖麻油聚乙二醇400单酯；蓖麻油聚乙二醇400单酯再与葡萄糖发生反应被糖苷化，即得蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷。

进一步的，上述蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷的制备方法具体包括以下步骤：

1）酸化：按重量将蓖麻油和浓硫酸按体积比10∶(0.5～1.5)的混匀，加热至100～110℃时，用蓖麻油将下层溶液pH值调节至2～3，保温反应25～35min，停止加热和搅拌，静置0.5～1h，取上层的油中水反复洗涤至放出水液的pH值为4～5为止，然后搅拌加热，在真空度为580~620mm/Hg下加热至240~260℃维持25～35min，进行脱水处理，使含水量降至万分之三以下，得脱水后的蓖麻油；

2）酯化：按重量计将上述脱水后的蓖麻油和聚乙二醇400按重量比（3.8～4.2）：（2.8～3.2）混匀，再加入重量聚乙二醇400与脱水后的蓖麻油两者总重量的2%～5%的对甲苯磺酸，在搅拌下加热至80~90℃，保温反应5.6～6.5h；然后取样测定粗酯的酸值，依酸值加入过量碳酸钠，在搅拌下升温至100～120℃后反应8~12min；获得蓖麻油聚乙二醇400单酯；

3）糖苷化：将上述制得的蓖麻油聚乙二醇400单酯与一水葡萄糖按摩尔比1:1混匀，并加入路易斯酸作催化剂，在真空和氮气保护下于110～130℃反应5.5～6.5h，反应至溶液由浑浊变成淡黄色透明液体，即得到最终成品，即蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷。

上述一种渔用浸泡疫苗佐剂的使用方法，该方法包括以下步骤：

1）将上述制备的渔用浸泡疫苗佐剂中加入水搅拌混匀，得到的溶液为浸泡免疫溶液1；

2）将上述1）得到的浸泡佐剂溶液1与疫苗溶液按体积比1:（100~200）混合均匀，得到的混合溶液为浸泡免疫溶液2，其中渔用浸泡疫苗佐剂各组分的终浓度范围分别为：蓖麻油聚乙二醇单酯葡萄糖苷1~20µg/mL、氮酮0~10µg/mL、山莨菪碱0~30µg/mL；

3）将需要免疫的鱼体放入浸泡免疫溶液2中，充气浸泡15~30min，即完成免疫。

本发明的有益效果是：