[发明专利]用于区分棉铃虫和烟青虫的特异性引物与方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，具体地说，涉及一种用于区分棉铃虫和烟青虫的特异性引物与方法。

背景技术

棉铃虫与烟青虫是我国农作物上的重要害虫。他们同属于鳞翅目、夜蛾科、铃夜蛾属，亲缘关系极近。两者具有相似的形态和取食习性，它们之间有许多相同的寄主植物。例如它们均可以危害茄科植物。生产上极容易混淆，干扰农田害虫预测预报的准确性。

据研究发现，棉铃虫与烟青虫卵、幼虫及蛹的相似性达到人类肉眼几乎无法辨别的程度，只有在它们成虫期可以根据翅的颜色和花纹来区别。由于棉铃虫与烟青虫极近的亲缘关系，它们经常被科学家用于探究昆虫进化及物种形成的原因。然而如何去区分棉铃虫与烟青虫是一直困扰昆虫学家的难题。因此，开发一种快速准确棉铃虫与烟青虫的鉴定方法对生产和科研都有非常重要的意义。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种用于区分棉铃虫和烟青虫的特异性引物与方法。

为了实现本发明目的，本发明首先提供一种用于区分棉铃虫和烟青虫的特异性引物，所述特异性引物具体如下：

Primer-F：5’-AACACCAATTAAAACTCCCACAATT-3’；

Primer-R：5’-TGTGAGCCAGGTTGGTTTCTAT-3’。

本发明还提供了区分棉铃虫和烟青虫的方法，所述方法以待测样本的基因组DNA为模板，利用所述特异性引物进行PCR扩增，对扩增产物进行测序，根据产物核苷酸序列的155bp-158bp位置是否存在TTAT碱基序列，判断样本为棉铃虫或烟青虫。

进一步地，所述PCR反应体系为：

无菌水28.75μL10×PCR反应缓冲液5μL25mmol/L氯化镁5μL2.5mmol/L dNTP4μL10μmol/L Primer-F2.5μL10μmol/L Primer-R2.5μL5u/μL Taq酶0.25μL25mg/L DNA模板2.0μL总体积50μL

进一步地，所述PCR反应程序为：95℃预变性3min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸30s，循环35次；72℃延伸7min。

更进一步地，所述方法具体包括以下步骤：

1)合成特异性引物；

2)采用动物组织细胞提取待测样本的基因组DNA；

采用动物组织细胞提取基因组DNA的方法为本领域常规方法；

3)在PCR反应管中加入反应体系，混匀；

4)将PCR管放入台式离心机中离心10s后插入PCR仪中；

5)运行PCR反应；

6)反应结束后取出PCR反应管，对PCR反应产物进行电泳检测；

7)以无菌水作为空白对照PCR反应体系的模板；

8)将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳；