[发明专利]级联激活的免疫细胞、制备方法以及应用

说明书

本发明提供一种级联激活的免疫细胞、制备方法以及应用，所述制备方法包括以下步骤：分离得到单核细胞；进行培养，加入CD3抗体和干扰素γ，初级刺激单核细胞，进入初级刺激孵育期，培养；加入IL‑2、IL‑4、IL‑1和巨噬细胞集落刺激因子,进一步活化培养，得到活化后的外周血单核细胞。通过上述方法得到的活化后的外周血单核细胞，可用于制备治疗乳腺癌、恶性黑色素瘤的药物。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种级联激活的免疫细胞、制备方法和应用。

背景技术

CD3体外活化T细胞在特定细胞因子环境下会引起其他细胞，特别是抗原呈递细胞(APC)的激活。抗原呈递细胞，也被称为信息细胞，在血液中循环，并提呈外源蛋白，肿瘤蛋白作为变异的非自体抗原也可被其提呈。在APC中，树突状细胞(DC)是抗原提呈效力最高的一种细胞，DC可通过特定细胞因子(如IL-4、GMCSF)活化外周血中的单细胞(monocytes)获得，肿瘤抗原加DC现正作为肿瘤疫苗在肿瘤治疗方面进行实验。如果未经活化的T细胞被加入到活化的呈递肿瘤抗原的APC中，T细胞的活化和启动可通过特异性I细胞受体完成，从而获得特异性识别和杀伤肿瘤的能力。这种利用抗原呈递细胞结合抗CD3单克隆抗体及特定细胞因子的两步法链式反应激活的细胞被称为CAPRI细胞。CAPRI细胞疗法的效应细胞(具有杀伤肿瘤细胞能力的细胞)有两种：以CD4+和CD8+为主的T辅助细胞和T杀伤细胞(细胞毒细胞)，约占80％，以CD3+和CD56+为主的NKT细胞、以及NK细胞和树突状细胞(DC)，这部分效应细胞约占20％。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种新的激活的免疫细胞的制备方法。

实现上述目的的技术方案如下：

一种激活的免疫细胞的制备方法，包括以下步骤：

分离得到外周血单核细胞；

分离后的单核细胞与CD3抗体共培养2～4小时后，加入干扰素γ共培养20～24小时，初级刺激单核细胞，进入初级刺激孵育期；

加入IL-2(白细胞介素-2)、IL-4(白细胞介素-4)、IL-1(白细胞介素-1)和巨噬细胞集落刺激因子,进一步活化培养70～72小时，从而进入连续刺激效应细胞表达，得到级联激活的免疫细胞。

在其中一个实施例中，进行培养时单核细胞的接种密度为1～2x10⁹/L，0.5ml/孔，所述CD3的加入量为1～2ug，干扰素γ的加入量为1000～2000IU。

每孔中加入的所述IL-2、IL-4、IL-1和巨噬细胞集落刺激因子的量分别为：1000～2000IU、100～200ng、40～60ng和300～500ng。

本发明的另一个目的是提供一种级联激活的免疫细胞。

具体技术方案如下。

一种级联激活的免疫细胞，其通过上述制备方法得到。

本发明的另一目的是提供所述级联激活的免疫细胞的应用。

具体技术方案如下。

上述级联激活的免疫细胞，在制备治疗乳腺癌的药物中的应用。

本发明的另一目的是提供一种治疗乳腺癌的药物。

具体技术方案如下。

一种治疗乳腺癌的药物，其活性成分包括有上述级联激活的免疫细胞。

本发明的另一目的是提供一种治疗恶性黑色素瘤的药物。

具体技术方案如下。

上述活化后的级联激活的免疫细胞，在制备治疗恶性黑色素瘤的药物中的应用。