[发明专利]抗人神经生长因子的中和性单克隆抗体12C11及其杂交瘤细胞株

权利要求书

1.抗人神经生长因子的中和性单克隆抗体12C11，由保藏号为CGMCC No.8772的杂交瘤细胞所分泌，所述中和性单克隆抗体与人神经生长因子具有中和反应效应，其分类亚型为：重链IgG1、轻链Kappa。

2.分泌人神经生长因子中和性单克隆抗体12C11的杂交瘤细胞株，其保藏号为CGMCC No.8772。

3.一种止痛药剂，其特征在于：其药效成分包含权利要求1所述的中和性单克隆抗体12C11。

4.一种抗过敏药剂，其特征在于：其药效成分包含权利要求1所述的中和性单克隆抗体12C11。

5.一种抗哮喘的药剂，其特征在于：其药效成分包含权利要求1所述的中和性单克隆抗体12C11。

6.一种用于治疗银屑病的药剂，其特征在于：其药效成分包含权利要求1所述的中和性单克隆抗体12C11。

7.一种鉴定权利要求1所述的抗人神经生长因子的中和性单克隆抗体12C11的中和活性的方法，步骤如下：

(1)用维持培养基配制抗体样品溶液，在预稀释浓度40μg/ml的基础上，进行2倍系列稀释，共9个稀释度，将待测样品溶液转移至96孔板中，每个浓度3个复孔，每孔50μl，另选择3个孔加入不含抗体的培养基作为阴性对照，每孔100μl；

所述9个稀释度分别为：10μg/ml、5μg/ml、2.5μg/ml、1.25μg/ml、0.625μg/ml、0.3125μg/ml、0.15625μg/ml、0.078125μg/ml、0.039063μg/ml；

(2)另用维持培养基配制200ng/ml的NGF蛋白溶液，将其添加至含有抗NGF抗体样品溶液的96孔板中，每孔50μl，阴性对照孔不添加NGF培养基，另选择3个孔加入阳性对照溶液100ng/ml NGF，每孔100μl，然后将96孔板放置于37℃培养箱孵育1h；

(3)取足量TF-1细胞培养物，离心收集TF-1细胞，PBS洗涤2次，离心收集的细胞用维持培养基重悬，配成每1ml含5×10⁴个细胞的细胞悬液，接种于96孔细胞培养板中含有NGF蛋白及抗NGF抗体的孔、阴性对照孔和阳性对照孔中，每孔100μl；将96孔板置于37℃，5％二氧化碳培养；72h后，每孔加入MTS溶液20μl，于37℃，5％二氧化碳培养3小时；

(4)从培养箱中取出96孔板，放入酶标仪，于波长490nm处测定吸光度，记录测定结果；

(5)通过待测制品的吸光度，按照公式：抗NGF抗体孔的中和抑制率(％)＝[(阳性孔OD490nm平均值-阴性孔OD490nm平均值)-(抗体孔OD490nm平均值-阴性孔OD490nm平均值)]/(阳性孔OD490nm平均值-阴性孔OD490nm平均值)，计算每孔的中和抑制率，中和抑制率越高，则抗NGF抗体的中和活性越强。