[发明专利]一对特异识别绵羊IL8基因的多肽及其编码基因和应用

说明书

本发明公开了一对特异识别绵羊IL8基因的多肽及其编码基因和应用，该多肽对由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由14个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有两个双连氨基酸；所述多肽乙由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有两个双连氨基酸。本发明可实现在细胞或个体水平上对绵羊IL8基因进行敲除或修饰，以解析绵羊IL8基因的功能、构建绵羊IL8基因突变库或获得相关疾病模型，为绵羊育种及医药研发服务。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一对特异识别绵羊IL8基因的多肽及其编码基因和应用。

背景技术

白细胞介素-8是趋化因子家族的一种细胞因子，在参与和调节生殖生理和病理过程的作用已得到肯定，其作用机制之一就是与其特异性受体结合而发挥作用。

IL-8主要由单核-巨噬细胞产生；其他如成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、肝细胞等亦可在适宜的刺激条件下产生IL-8。IL-8的分子量约8KD，主要活性形式为72个氨基酸。IL-8的氨基酸顺序与许多炎症因子有较高的同源性，属于同一个家族；现初步证实IL-8家族(亦称pf4家族)至少有12个成员。IL-8可以分成α和β亚群，IL-8的受体也有两型：一种只能与IL-8结合，而另一种还能结合其它的趋化因子；中性粒细胞和嗜碱性粒细胞表面均表达丰富的IL-8受体。

IL-8的主要生物学活性是吸引和激活中性粒细胞，曾被命名为中性粒细胞激活肽(NAF)、粒细胞趋化肽(GCP)、中性粒细胞激活因子(NAF)等。中性粒细胞与IL-8接触后发生形态变化，定向游走到反应部位并释放一系列活性产物；这些作用可导致机体局部的炎症反应，达到杀菌和细胞损伤的目的。此外IL-8对嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞也有一定作用。

基因表达谱芯片研究结果显示，敖汉细毛羊被毛丰富的体侧部皮肤IL8基因的表达量相对于腹股沟部(无被毛)上调7.24倍(Zhao et al.，2012)。由此可见，IL8基因可作为绵羊抗病育种及羊毛经济性状育种的一个重要候选基因。在细胞或个体水平上对绵羊IL8基因进行敲除或修饰，可解析绵羊IL8基因的功能，为绵羊育种及医药研发服务。

转录激活子样效应因子核酸酶(transcription activator-like effectornucleases，TALENs)技术是一个高效的基因打靶新工具。转录因子激活效应物家族中有一种蛋白(TALEs)能够识别、结合DNA。TALE与DNA序列特异性结合主要是由TAL结构内34个恒定氨基酸序列介导。将TALEs与Fokl核酸内切酶的切割域相连接，形成TALENs，从而可以实现对基因组DNA序列的精确修饰。TALENs是一种异源二聚体分子(两单位的TALE DNA结合结构域融合到一单位的催化性结构域)，能够切割两个相隔较近的序列，从而使得特异性增强。

发明内容

本发明的目的是提供一对特异识别绵羊IL8基因的多肽及其编码基因和应用。本发明利用这对多肽构建获得的一对重组的转录激活子样效应因子(TALE)能够特异性地识别绵羊IL8基因。本发明还利用这对转录激活子样效应因子构建获得的一对转录激活子样效应因子核酸酶(TALENs)，能够对绵羊IL8基因进行准确、高效地靶向修饰。

具体地，本发明的目的是这样实现的：

一对特异识别绵羊IL8基因的多肽(命名为特异多肽对)，由多肽甲和多肽乙组成；所述多肽甲由14个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有两个双连氨基酸；所述多肽乙由16个TAL核酸识别单元组成，每个TAL核酸识别单元中具有两个双连氨基酸；