[发明专利]一种紫菜多肽原液的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域的技术领域，尤其涉及一种紫菜多肽原液的制备方法。

背景技术

紫菜含有高达30％左右的蛋白质以及碘、多种维生素和无机盐类，味道鲜美，除食用外还可用以治疗甲状腺肿大和降低胆固醇，是一种重要的经济海藻，广泛分布于世界各地，但以温带为主。

目前紫菜的加工方式比较单一，主要是做成紫菜干制品，食用时需要泡发、烹调等处理，或是将紫菜烤熟之后经调味处理而成海苔。因此，一些研究者进一步探究了紫菜深加工的方式，通过提取出紫菜中的营养成分，用以制备天然产物，或是以此为基础开发饮料。研究证明，紫菜含有丰富的紫菜多肽，它具有降血压的功效，为此，提取制备紫菜多肽也成为研究的热点。

在现有技术中，通常采用蛋白酶降解法来制备紫菜多肽，蛋白酶的酶解时间在5小时以上，且降解后的沉淀物被直接丢弃。本发明人经过大量的研发和实践，在一次对紫菜进行蛋白酶降解实验中，对沉淀物进行分析，发现还存在大量未被蛋白酶降解的紫菜底物，本发明人再试图增加蛋白酶量及延长酶解时间，但最终沉淀物仍然还有大量未被降解的紫菜底物，也就是说，在一次蛋白酶解过程中，不管是增加蛋白酶量还是延长酶解时间，对于紫菜多肽的提取率来说，增加的幅度都是非常有限。因此沉淀物酶解后被大量丢弃也得到了“合乎情理”的解释。有鉴于此，本发明研究和设计了一种紫菜多肽原液的制备方法，本案由此产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫菜多肽原液的制备方法，通过蛋白酶二次降解法，以进一步提高紫菜多肽的提取率。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题的技术方案是：

一种紫菜多肽原液的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、制备紫菜颗粒匀浆：

以坛紫菜为原料，烘干后用高速粉碎机粉碎，形成干紫菜粉，所述干紫菜粉加水过夜浸泡使之充分溶胀，再用砂磨机进一步研磨，成颗粒细小的紫菜颗粒匀浆；

步骤二、采用二次酶法酶解：

第一次酶解时，将所述紫菜颗粒匀浆作为底物，将蛋白酶按质量百分比1.5％，以所述干紫菜粉重量计，加入所述底物中，调pH至2-9，在35~60℃下酶解3h，得到酶解液L1，将所述酶解液L1在15000×g、4℃条件下离心30min，得到上清液S1和沉淀物S2；

第二次酶解时，按质量体积比1:10，以所述干紫菜粉重量计，将沉淀物S2加入水中使之重悬，得到紫菜悬浮液，将蛋白酶按质量百分比1.0％，以所述干紫菜粉重量计，加入所述紫菜悬浮液中，调pH至2-9，在35~60℃下酶解2h，得到酶解液L2，将所述酶解液L2在8000×g、4℃条件下离心15min，得到上清液S3和沉淀物S4，弃去所述沉淀物S4，收集、合并所述上清液S1和所述上清液S3，得到上清液S5；

步骤三、分离纯化：

将所述上清液S5在沸水浴中煮10min灭酶，之后在8000×g、4℃条件下离心15min，得到上清液S6和沉淀物S7，弃去所述沉淀物S7，收集所述上清液S6，即为紫菜多肽原液。

作为实施例的优选方式，所述步骤一中，将所述干紫菜粉按照质量体积比1:15加入水中，在4℃下过夜浸泡。

作为实施例的优选方式，所述步骤一中，所述砂磨机的转速为2000r/min，研磨时间为80min。

作为实施例的优选方式，所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶或风味酶以及上述酶的组合。

本发明的有益效果是：采用多重破碎、酶解工艺，将紫菜烘干后进行粉粹、研磨，使紫菜细胞充分破碎，有利于内容物充分释放出来，利用复合酶进行二次酶解，进一步将离心后紫菜渣中残留的蛋白质转化成多肽，提高了多肽提取率，充分利用了紫菜原料，节约成本，且操作简单。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步说明。

本发明以坛紫菜为原料，经过烘干、粉碎、加水浸泡、研磨等处理，得到颗粒细小的紫菜颗粒匀浆，加入一定量的蛋白酶二次酶解，得到酶解液，酶解液经灭酶、离心处理后即得紫菜多肽原液。

通过GB 50095-2010中的第一法凯氏定氮法测定紫菜原液中蛋白质含量，以评估紫菜多肽的提取率。通过血管紧张素转移酶（ACE）的体外抑制实验来反应紫菜多肽的降血压活性。

紫菜多肽降血压活性的测定