[发明专利]BC-02的液相色谱检测方法

权利要求书

1.一种BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）取BC-02标准品采用水制备BC-02标准溶液，或取BC-02标准品和5-Fu标准品采用水制备混合标准溶液；

（2）取待测样品采用水制备待测样品溶液；

（3）系统适用性试验：取0.5mg/ml 5-Fu水溶液100μl和10mg BC-02用水稀释定容到10ml容量瓶中，配制成系统适用性溶液，取系统适用性溶液进样20μl，5-Fu与BC-02以及杂质与BC-02之间的分离度R＞1.5；

（4）取步骤（2）配制的待测样品溶液5～20μl注入液相色谱仪，流动相流速为0.5～1.5mL/min，检测波长为：200～300nm；检测器：PAD、柱温为30～40℃；

所述流动相包括A相和B相，A相为甲醇-水；B相为乙腈-水-TFA-TEA；A相与B相的体积比为10:90，所述的A相中甲醇与水体积比5:95，用磷酸调节pH值为3.5，B相中乙腈、水、TFA和TEA的体积比为25:75:0.15:0.1；

（5）采用步骤（4）检测条件测定步骤（1）配制的标准溶液或混合标准溶液，以外标法计算待测样品中BC-02或者BC-02中杂质的含量。

2.根据权利要求1所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：步骤（1）所述BC-02标准品的纯度大于99％，为了保证标准品纯度，使用前可进行重结晶处理；所述5-Fu标准品的纯度大于99％。

3.根据权利要求1所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：步骤（1）所述BC-02标准溶液质量浓度为0.05～1.5mg/mL；混合标准溶液质量浓度为0.002～0.015mg/mL。

4.根据权利要求1所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：步骤（1）混合标准溶液配制方法为，先分别配制0.5mg/ml的5-Fu标准品的水溶液和1mg/ml的BC-02标准品的水溶液，分别取以上两种溶液各100μl置同一10ml容量瓶中，用水稀释定容，得到5-Fu浓度5μg/ml、BC-02浓度10μg/ml的混合标准溶液。

5.根据权利要求1所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：步骤（2）所述待测样品溶液的质量浓度为0.05～1.0mg/mL。

6.根据权利要求1所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：步骤（1）和（2）所述标准溶液、混合标准溶液和待测样品溶液注入液相色谱仪之前通过孔径为0.2～0.5μm的过滤膜过滤。

7.根据权利要求1所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：液相色谱仪的色谱柱为C₁₈柱，柱长150～300mm；色谱柱填料为用于亲水性样品分离和在含高比例水的流动相条件下具有强的保留的填料。

8.根据权利要求7所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：色谱柱型号phenomenex，柱长250mm，直径4.6mm，孔径5μm，填充剂为C₁₈键合烷基硅胶、粒径100A。

9.根据权利要求1所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：测定BC-02含量时采用BC-02标准溶液，等度洗脱方法；测定BC-02中的杂质含量时采用混合标准溶液，梯度洗脱方法，所述的梯度洗脱方法为

。

10.根据权利要求1所述的BC-02的液相色谱检测方法，其特征在于：本发明方法能够精确测定BC-02的含量，以及检测BC-02中的杂质含量；所述的杂质包括已知杂质5-Fu和未知杂质，未知杂质即合成过程中产生的副产物、中间体和降解产物。