[发明专利]用于基因快速检测的细胞裂解液

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及一种用于基因快速检测的细胞裂解液。

背景技术

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reation，PCR）是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，为最常用的分子生物学技术之一。自1985年穆勒发明聚合酶链式反应（PCR）以来，生物科学家的研究方式逐渐被改变。这项能在短时间内获得大量DNA片段的技术，在法医学、DNA克隆、基因组分析、遗传病和传染病诊断中发挥着巨大作用。

PCR技术一经问世就被迅速而广泛地用于分子生物学的各个领域。它不仅可以用基因的分离、克隆和核苷酸序列分析，还可以用于突变体和重组体的构建，基因表达调控的研究，基因多态性的分析，遗传病和传染病的诊断，肿瘤机制的探索，法医鉴定等诸多方面。例如：与许多疾病相关的单核苷酸多态性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP) 决定了人类疾病的易感性和药物反应的差异性，对群体遗传学、制药业、法医学、癌症及遗传性疾病甚至进化的研究都将产生不可估量的影响。通过研究SNP图谱，可以更深刻地认识癌症、糖尿病、血管性疾病和某些精神性疾病等发病率高的多基因疾病的发生机制。

PCR反应体系中包括DNA聚合酶、dNTPs、PCR缓冲液、Mg²⁺、引物等，在反应时加入相应的模板DNA即可。目前，进行PCR反应都最常用的样本是血液，血痕，带毛囊的毛发，口腔粘膜细胞等，其它如精斑，混合斑，肌肉，牙齿，骨骼，甚至胎儿的羊水等，但是样本不能直接用于PCR反应，需要加入从样本中提取纯化的DNA作为模板。如果采用血液样本，从采血到提取纯化DNA完成，至少需要4个小时、效率较低。现有的细胞裂解方法包括化学裂解、酶裂解和机械裂解，化学裂解和酶裂解通常是比较温和的方法，通常会很少使DNA 断裂，是提取纯化DNA中常用的方法。目前还没一种细胞裂解方法直接应用于PCR。因此，直接将细胞作为模板加入PCR反应混合液中进行反应，则在PCR过程中细胞裂解不彻底，并且细胞裂解之后的细胞碎片以及一些蛋白酶会对PCR反应造成阻碍，导致基因扩增效率低或实验失败。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种反应快速、效率高的用于基因快速扩增或检测的细胞裂解液。

为了解决上述技术问题，本发明提供如下技术方案: 用于基因快速检测的细胞裂解液，所述的细胞裂解液的原料由十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚组成。

采用本发明技术方案的用于基因快速检测的细胞裂解液， 细胞裂解液的作用是溶解细胞质和细胞膜，破坏分子间许多微弱的化学键，分解一些蛋白酶，降低细胞裂解之后产生的杂质对PCR反应的影响。所述的细胞裂解液的原料由十二烷基硫酸钠、聚乙二醇辛基苯基醚组成。聚乙二醇辛基苯基醚是一种非离子型表面活性剂，十二烷基硫酸钠是一种能够使蛋白质变性的强阴离子去污剂。在细胞和分子生物学领域，十二烷基硫酸钠，简称SDS，经常被用于核酸抽提操作中破坏细胞壁及裂解核酸与蛋白复合物，在较高温度下，破坏蛋白质与DNA的结合，使DNA释放出来。聚乙二醇辛基苯基醚简称Triton X-100，被用于分解蛋白酶，聚乙二醇辛基苯基醚在基因工程中还用作限制性内切酶的缓冲液的成分之一。为了解决细胞裂解在基因检测过程中裂解不彻底，细胞碎片以及一些蛋白酶会对PCR反应造成阻碍，造成实验失败的问题，发明人在通过多次试验，把细胞裂解液的成分以一定的比例混合加在PCR反应混合液中，实现了直接以口腔细胞为模板进行PCR 反应，从而可在PCR反应的过程中省略提纯DNA的步骤，且避免污染样品，从而节约时间，通过SDS和Triton X-100混合组成，可以实现裂解细胞以及降低细胞破裂之后细胞碎片对PCR的影响，简化实验步骤，检测过程仅需要约1h。

进一步，所述的细胞裂解液的原料终浓度为：

十二烷基硫酸钠  0.005-0.015%w/v

聚乙二醇辛基苯基醚  0.001-0.03%w/v。

进一步，所述的细胞裂解液的原料终浓度为：

十二烷基硫酸钠  0.005%w/v

聚乙二醇辛基苯基醚  0.01%w/v。

进一步，所述的细胞裂解液的原料终浓度为：

十二烷基硫酸钠  0.009%w/v

聚乙二醇辛基苯基醚  0.02%w/v。

进一步，所述的细胞裂解液的原料终浓度为：

十二烷基硫酸钠  0.005%w/v

聚乙二醇辛基苯基醚  0.001%w/v。