[发明专利]一种脾氨肽原液的制备方法

权利要求书

1.一种脾氨肽原液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）取料、磨碎、匀浆：将新鲜的健康的动物脾脏去脂肪及缔结组织，然后磨碎匀浆；

2）速冻、融化：将步骤1）得到的匀浆液速冻，速冻完成的匀浆液放入恒温箱至完全融化；反复两次；速冻温度为-25--30℃，时间为1.5-3h；融化温度为35-45℃；

3）蛋白酶水解：将步骤2）得到的匀浆液中加入蛋白酶水解，所述蛋白酶与匀浆液的重量配比为1：60-100，酶解温度35-45℃；PH值为7.5-8.0；

4）高压破碎：将步骤3）酶解后的溶液放入高压细胞破碎机中破碎，高压破碎的压力为100-110Mpa，时间0.8-1.5h；

5）核酸酶水解：将步骤4）破碎得到的溶液加入核酸酶水解，所述核酸酶与破碎后溶液的重量配比为1：60-250，酶解温度50-60℃；PH6.2-6.8；时间2-3h；

6）离心、超滤：将双酶酶解后溶液放入冷离心机中离心，离心后取上清液进入超滤器超滤，所述离心机的转速为转速4000r/min，离心时间为30min；超滤截留分子量为10000；

7）制备型高效液相色谱纯化：将超滤后溶液进入制备型高效液相色谱纯化，得到脾氨肽原液，所述高效液相色谱参数为：反相高效液相色谱RP-HPLC，固定相苯烷基和氰基键合硅胶孔径100万，流动相为纯化水和缓冲液，收集分子量2000-4000。

2.根据权利要求1所述的脾氨肽原液的制备方法，其特征在于，所述蛋白酶与匀浆液的重量配比为1：80。

3.根据权利要求1所述的脾氨肽原液的制备方法，其特征在于，所述核酸酶与破碎后溶液的重量配比为1：100。