[发明专利]一种痛风血清miRNAs生物标志物及其表达量的检测方法

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术和医学领域，涉及一种痛风血清miRNAs生物标志物及其表达量的检测方法。

背景技术：

痛风是一种与遗传有关的长期嘌呤代谢障碍或尿酸排泄障碍，导致血尿酸持续增高和尿酸盐结晶沉积，引起组织损伤的一组临床综合征。痛风性关节炎是慢性高尿酸血症形成的尿酸结晶在关节腔内沉积而引发的关节炎，是痛风的最重要病症。随着人们生活方式的改变，痛风在我国发病率不断上升，南方和沿海经济发达地区发病率尤高，因此越来越受到医学界的重视。痛风引起的不可逆的关节破坏和功能障碍给人们的健康带来了极大的危害。痛风不仅能引起关节肿胀，而且可诱发和加重脂代谢紊乱、糖尿病及心血管疾病等，增加心脑血管疾病、代谢综合征及肾脏疾病病人的病死率。因此，痛风已成为严重威胁人类健康的常见病、多发病。近年来，随着人们生活水平的提高，高尿酸血症的患病率越来越高，而痛风的发病率也同样有明显的升高，但目前临床尚缺乏有效的治疗药物，亟需更多的研究进一步研究分析痛风的发病机制和检测方法。

目前痛风最准确的检测方法为关节滑液或痛风石的抽吸物中的尿酸盐晶体检测，偏振光显微镜下表现为负性双折光的针状或杆状的单钠尿酸盐晶体，是当前检测痛风不可替代的金标准，急性发作期，单钠尿酸盐晶体可见于关节滑液中白细胞内、外，也可见于痛风石的抽吸物中；在发作间歇期，单钠尿酸盐晶体也可见于曾受累关节的滑液中，但是尿酸盐晶体检测不仅会带给患者创伤和较重的疼感，而且关节滑液的穿刺吸取比较困难，所以，痛风的分子生物学研究日益受到国内外的重视，需要敏感而特异性的无创性的血清学指标，从分子水平上提高对痛风的检测水平。

MicroRNAs(miRNAs)是一类分布广泛的非编码的单链小分子RNA，其通过对mRNA降解或抑制其翻译，在转录后对靶基因的表达水平进行调节，从而参与细胞分化、生长、凋亡、代谢等功能。目前研究证实miRNAs在很多疾病中具有重要作用，而且与一些炎症性疾病的发病紧密相关。研究表明，机体内组织、器官的代谢异常或器质性病变可能导致特定疾病状态下某些血清miRNAs表达水平的升高或降低。近年来发现血清中存在大量丰富且稳定的miRNAs，通过对患者血清中miRNAs表达谱与对照组进行对比分析，发现不同疾病中具有特定的表达谱，可为疾病的无创性早期检测提供一条新的途径。miRNAs在血液中可长期稳定存在，反复冻融、长期保存等各种处理方法均不会造成血清miRNAs的损失，而外周血标本的获得却十分简便，在血液中检测出痛风特异性的miRNAs并将其作为痛风的生物学标志具有重要的意义，目前还未见有关痛风血清miRNAs的公开报道。因此，提供一种痛风血清miRNAs生物标志物及其表达量的检测方法，确定痛风miRNAs表达谱，筛选痛风特异表达的miRNAs，建立血清miRNAs诊断模型，有助于实现对痛风的无创准确诊断及早期治疗。

发明内容：

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点，寻求设计提供提供一种痛风血清miRNAs生物标志物及其表达量的检测方法，建立痛风血清miRNAs表达谱，揭示血清miRNAs对痛风检测的价值，为临床上痛风患者的无创准确诊断提供支持。

为了实现上述目的，本发明涉及的痛风血清miRNAs生物标志物包括上调表达的hsa-miR-3146、hsa-miR-4449和hsa-miR-4531以及下调表达的hsa-miR-451a、hsa-miR-223-3p、hsa-miR-589-5p和hsa-miR-885-5p。

本发明涉及的痛风血清miRNAs为来自外周静脉血的血清。

本发明涉及的痛风血清miRNAs生物标志物能用于制备痛风诊断试剂或生物芯片等工具。

本发明涉及的痛风血清miRNAs生物标志物的表达量的检测方法如下：

(1)逆转录：采用逆转录试剂盒和miRNAs特异性茎环结构逆转录引物进行miRNAs逆转录反应，反应体系包括3uL 5*的逆转录引物、1.5uL 10*的逆转录缓冲液、0.20uL的RNA抑制剂、0.15uL 100mmol/L的dNTP和dTTP混合物、1uL逆转录酶，每个反应体系中加入9.15uL RNA，总反应体系为15uL；该方法的反应条件为：16℃反应30分钟，42℃反应30分钟，最后85℃孵育5分钟；