[发明专利]一种猪Lgr5基因及其应用

说明书

本发明属于家畜分子分子生物学技术领域，具体公开了一种猪Lgr5基因及其应用，所述基因的序列如SEQ ID NO：1所示，本发明利用人Lgr5基因和小鼠Lgr5基因为参照序列，设计特异性引物，运用RACE、普通PCR、重叠PCR的方法首次克隆出猪Lgr5 cDNA；后续研究发现过表达Lgr5基因能够促进细胞增殖，加快损伤的细胞修复，本发明所述Lgr5为后续猪Lgr5基因的功能研究和小肠干细胞的研究奠定了重要基础。

技术领域

本发明涉及家畜分子生物学技术领域，更具体地，涉及一种猪Lgr5基因及其应用。

背景技术

Lgr5，又名GPR49，HG38，FEX，是G-蛋白偶联受体超家族成员，是由具有18个富含亮氨酸的重复单位和7个跨膜区域组成的大分子蛋白；最新研究证明，Lgr5是Wnt信号通路下游的靶向基因，并可作为肠等部位的干细胞标记物，Lgr5表达的产物在胚胎和器官的发育以及多种肿瘤的发生、发展中均发挥着重要作用。

Lgr5基因位于人12号染色体12q22-q23，小鼠10号染色体D2|10，大鼠（Rattusnorvegicus）7号染色体7q22，恒河猕猴（Macaca mulatta）11号染色体，牛（Bos taurus）5号染色体，家鸡（Gallus gallus）1号染色体，家猪（Sus Scrofa）5号染色体上；目前国内外关于猪Lgr5基因的研究很少。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中没有猪Lgr5全基因序列的缺陷，提供一种Lgr5基因。

本发明的第二个目的是提供上述Lgr5基因编码的蛋白。

本发明的第三个目的是提供含有上述Lgr5基因的载体或/和重组体。

本发明的第四个目的是提供上述基因或/和基因编码的蛋白的应用。

本发明的目的是通过以下技术方案予以实现的：

一种猪Lgr5基因，其基因序列如SEQ ID NO：1所示。

现有技术中还没有克隆出猪的Lgr5基因，发明人在人Lgr5基因和鼠Lgr5基因的基础上，通过分子生物学的手段克隆出Lgr5基因，在克隆Lgr5基因的过程中，通常是选取人Lgr5基因和鼠Lgr5基因同源的片段进行RACE，从而进一步克隆出Lgr5基因，但是，发明人通过设计同源引物的方法无法克隆出Lgr5基因，发明人设计了特异性的引物才克隆出了Lgr5基因。

本发明所述能够扩增Lgr5基因的引物序列如SEQ ID NO：3～13所示。

本发明还提供编码猪Lgr5基因的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明还提供了一种用于检测猪Lgr5基因的引物，所述引物序列如SEQ ID NO：14～15所示。

含有Lgr5基因的载体或含有所述载体的重组体也属于本发明的保护范围。

本发明还提供Lgr5基因和/或Lgr5基因编码的蛋白在制备促进细胞增殖的制剂中的应用，具体地，所述细胞为猪的小肠上皮细胞。

本发明还提供Lgr5基因和/或Lgr5基因编码的蛋白在制备加快细胞损伤修复的制剂中的应用，具体地，所述细胞为猪的小肠上皮细胞。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明提供了一种猪Lgr5基因，所述基因的序列如SEQ ID NO：1所示，本发明利用人Lgr5基因和小鼠Lgr5基因为参照序列，设计特异性引物，运用RACE、普通PCR、重叠PCR的方法首次克隆出猪Lgr5 cDNA；后续研究发现过表达Lgr5基因能够促进细胞增殖，加快损伤的细胞修复，本发明所述Lgr5为后续猪Lgr5基因的功能研究和小肠干细胞的研究奠定了重要基础。