[发明专利]一种需钠弧菌发酵生产琼胶酶的培养基及其发酵方法

权利要求书

1.一种需钠弧菌发酵生产琼胶酶的培养基，其特征在于：包括菌种活化培养基、种子培养基及发酵培养基；

所述菌种活化培养基为：琼脂20g/L，蛋白胨5g/L，酵母膏5g/L，NaCl 30 g/L，MgSO₄·7H₂O 5 g/L，KCl 1 g/L，CaCl₂ 0.2 g/L，K₂HPO₄ 0.1 g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02 g/L，pH 7.5，121℃灭菌20 min；

所述种子培养基为：蛋白胨5 g/L，酵母膏1 g/L，NaCl 30 g/L，MgSO₄·7H₂O 5 g/L，KCl 1 g/L，CaCl₂ 0.2 g/L，K₂HPO₄ 0.1 g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02 g/L，pH 7.5，121℃灭菌20 min；

所述发酵培养基为：琼脂3.4 g/L，酵母膏6.5 g/L，NaCl 20 g/L，MgSO₄·7H₂O 5 g/L，KCl 1 g/L，CaCl₂ 0.2 g/L，K₂HPO₄ 0.1 g/L，FeSO₄·7H₂O 0.02 g/L，pH 7.5，121℃灭菌20 min。

2.一种如权利要求1所述的需钠弧菌生产琼胶酶的发酵方法，其特征在于：包括如下步骤：

种子的活化与制备：将上述需钠弧菌菌种接至菌种活化培养基中活化，活化的菌种接种至装有种子培养基的摇瓶中培养，获得摇瓶种子液；

摇瓶发酵：摇瓶种子液接种至装有适用于需钠弧菌产琼胶酶发酵培养基的摇瓶之中，25℃培养24 h，获得含有琼胶酶的发酵液；

罐上发酵：摇瓶种子液接种至装有发酵培养基的7 L发酵罐中，27℃培养36h，获得含有琼胶酶的发酵液；

中试放大发酵：摇瓶种子液接种至装有发酵培养基的20 L和200 L发酵罐中，27℃培养36h，获得含有琼胶酶的发酵液。

3.如权利要求2所述的需钠弧菌生产琼脂酶的发酵方法，其特征在于：所述种子的活化与制备步骤如下：

将-20℃保藏的甘油管菌种解冻后接于装有菌种活化培养基的试管斜面，25℃培养24 h，获得活化的需钠弧菌菌种；然后从试管斜面上挑取培养好的菌种于装有30 mL种子培养基的250 mL摇瓶中，25℃，180 r/min发酵24 h，再接入装有50 mL种子培养基的250 mL摇瓶中，25℃，180 r/min发酵12 h，获得摇瓶种子液。

4.如权利要求2所述的需钠弧菌生产琼胶酶的发酵方法，其特征在于：所述摇瓶发酵，将培养好的摇瓶种子液以2%的接种量接入装有50 mL发酵培养基的250 mL摇瓶中，25℃，180 r/min发酵24 h。

5.如权利要求2所述的发酵方法，其特征在于：所述罐上发酵，将培养好的摇瓶种子液按照2%的接种量接入装有5 L发酵培养基的7 L发酵罐中，27℃，500 r/min发酵36 h。

6.如权利要求2所述的需钠弧菌生产琼胶酶的发酵方法，其特征在于：所述中试放大发酵，将培养好的种子按照2%的接种量接入装有10 L发酵培养基的20 L罐中，27℃，150 r/min发酵36 h。

7.如权利要求2所述的一种需钠弧菌发酵生产琼胶酶的发酵方法，其特征在于：所述中试放大发酵，将培养好的种子按照2%的接种量接入装有5 L种子培养基的7 L罐中，25℃发酵12 h，培养好的种子液按照2%的接种量接入装有100 L发酵培养基的200 L罐中，27℃，100 r/min发酵36 h。