[发明专利]混合底栖硅藻溶液中纯种硅藻的分离方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种纯种底栖硅藻的分离方法，特别是混合底栖硅藻溶液中纯种底栖硅藻的分离方法。

背景技术

底栖硅藻是育苗生产中鲍苗的开口饵料。鲍鱼育苗生产中使用的底栖硅藻基本来源于自然海区，或者从海区藻类叶片上收集混合藻种，或者在海区挂板收集藻种，然后再到室内扩繁，但一般对藻种不进行选择，到达一定密度后，直接用于育苗生产，但这样获得的底栖硅藻，品质不能得到保证，对鲍鱼苗种生产的效果也不能保证。因为混合藻种中底栖硅藻种类繁多，底栖硅藻的种类和各种底栖硅藻的含量比例不能控制，而不同种类底栖硅藻，其体内不饱和脂肪酸等营养成分的含量差异很大，底栖硅藻的品质对鲍苗生产的影响也很大。所以，从混合藻种中筛选分离优质底栖硅藻纯种对鲍苗生产具有重要的实际意义。

从混合底栖硅藻中分离单种有几种方法，1）微吸管分离法；2）样品系列稀释分离法；3）水滴分离法；4）平板分离法。不管是哪一种方法，对于优势种或个体较大的种类，分离较容易。对于非优势种尤其是非优势种中个体较小的种类，分离非常困难。即使是运气好分离到非优势种中个体较小的单种，制成纯种也不容易。因为非优势小个体单种底栖硅藻的繁殖往往较慢，某些菌类在藻类培养基内（或上）可迅速繁殖，淹没非优势的单胞藻单种，使纯种难以获得。

发明内容

本发明是为了解决现有技术所存在的上述不足，提出一种在混合底栖硅藻溶液中分离纯种底栖硅藻的方法，它能够较容易地从混合藻液中分离出各个类别的底栖硅藻纯种，尤其是分离出非优势的底栖硅藻纯种，为鲍鱼育苗生产中筛选底栖硅藻良种提供技术支撑。

本发明的技术解决方案是：一种混合底栖硅藻溶液中纯种硅藻的分离方法，其特征在于：按照以下步骤进行：

首先将浓度为0.05-0.15g/ml的混合底栖硅藻溶液中75μm以上的颗粒碎屑滤除，然后将混合底栖硅藻溶液分为三等份，分别放入离心管中，将第一支离心管中混合底栖硅藻溶液摇匀，在350-450g RCF的条件下离心处理4-5min，得到沉淀A和第一上清液；

对第一上清液在850-950g RCF的条件下离心处理4-5min，得到沉淀B；

将第二支离心管中的混合底栖硅藻溶液摇匀，在850-950g RCF的条件下离心处理4-5min得到第二上清液，并对第二上清液在1650-1750g RCF的条件下离心处理4-5min，得到沉淀C；

将第三支离心管中的混合底栖硅藻溶液摇匀，在1650-1750g RCF的条件下离心处理4-5min得到第三上清液，并对第三上清液在2650-2750g RCF的条件下离心处理4-5min，得到沉淀D；

取0.05-0.2g沉淀A、全部的沉淀B、全部的沉淀C和全部的沉淀D，分别用20-40ml的无菌海水稀释混匀，分别得到沉淀A海水溶液、沉淀B海水溶液、沉淀C海水溶液和沉淀D海水溶液；

将沉淀A海水溶液在350-450g RCF的条件下离心处理5-6min，得到沉淀A₁，对得到的沉淀A₁进行第一离心处理7次，得到沉淀A₂，所述的第一离心处理为将沉淀用适量无菌海水稀释混匀，并对得到的该沉淀的海水溶液在350-450g RCF的条件下离心处理5-6min，获取沉淀；

将沉淀B海水溶液在850-950g RCF的条件下离心处理5-6min，得到沉淀B₁，对得到的沉淀B₁进行第二离心处理7次，得到沉淀B₂，所述的第二离心处理为将沉淀用适量无菌海水稀释混匀，并对得到的该沉淀的海水溶液在850-950g RCF的条件下离心处理5-6min；

将沉淀C海水溶液在1650-1750g RCF的条件下离心处理5-6min，得到沉淀C₁，对得到的沉淀C₁进行第三离心处理7次，得到沉淀C₂，所述的第三离心处理为将沉淀用适量无菌海水稀释混匀，并对得到的该沉淀的海水溶液在1650-1750g RCF的条件下离心处理5-6min，获取沉淀；

将沉淀D无菌海水溶液在2650-2750g RCF的条件下离心处理5-6min，得到沉淀D₁，对得到的沉淀D₁进行第四离心处理7次，得到沉淀D₂，所述的第四离心处理为将沉淀用适量无菌海水稀释混匀，并对得到的该沉淀的海水溶液在2650-2750g RCF的条件下离心处理5-6min，获取沉淀；