[发明专利]一种大岩桐离体再生体系建立方法

权利要求书

1.一种大岩桐离体再生体系建立方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）外植体消毒：从盒栽的生长旺盛的大岩桐植株上的幼嫩叶片为外植体，先用流水下冲洗1～3h后置于超净工作台中，再于用75%乙醇消毒5～30s后用无菌水洗3～5次，再用0.1%升汞溶液消毒1～10min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后备用；

（2）芽诱导培养：将步骤（1）处理后的叶片切成1×1cm²长的小块并接种到诱导培养基上,先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～3000lx，直至诱导形成不定芽；

（3）增殖培养：将步骤（2）培养的叶片边缘伤口处产生的愈伤组织上的不定芽长至约2.0～3.0cm时切下，剪掉其茎尖并接种至增殖培养基上进行增殖培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～5天，然后置于每天光照10～13小时，光照强度为1500～2500lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养2～3周后，其叶腋处就会长出许多小芽，再将这些小芽反复切割进行继代培养，得到不定芽；

（4）生根培养：将步骤（3）过程获得的高度约为3.5～4.5cm的小芽分切下并接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照12～15小时，光照强度为1500～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养20天左右即开始生根；

（5）炼苗移栽：将步骤（4）获得的高约5～7cm、生长健壮、根系粗壮、叶色浓绿的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3～5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基并在多菌灵溶液中浸泡8～10s，栽入由营养土:沙土＝3:1混合成的基质,保持湿度并给予60%～80%的遮阴处理。

2.根据权利要求1所述的一种大岩桐离体再生体系建立方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+0.5～2mg/L6-BA+0.1～1mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

3.根据权利要求1所述的一种大岩桐离体再生体系建立方法，其特征在于步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1mg/L NAA+0.5～1mg/L 6-BA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

4.根据权利要求1所述的一种大岩桐离体再生体系建立方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+0.1～2mg/L NAA+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。