[发明专利]靶向修饰的纯合生物体有效
| 申请号： | 201510087442.9 | 申请日： | 2010-08-11 |
| 公开（公告）号： | CN104830894B | 公开（公告）日： | 2019-03-01 |
| 发明（设计）人： | Y·多恩 | 申请（专利权）人： | 桑格摩生物治疗股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H1/02;A01H5/00 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 沈端 |
| 地址： | 美国加利*** | 国省代码： | 美国;US |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 靶向 修饰 生物体 | ||
【权利要求书】：
1.一种试剂盒的用途，其用于产生靶向基因修饰的纯合植物，其特征在于，
所述试剂盒包括：
(a)一对锌指核酸酶，其中每个锌指核酸酶结合所述植物的基因组的选定靶基因座中至少12个核苷酸的靶位点；以及
(b)用于靶向整合入所述选定靶基因座内的一种或多种外源序列；
其中，产生所述靶向基因修饰的纯合植物的用途包括以下步骤：
(i)将所述核酸酶和外源序列引入植物细胞；
(ii)鉴定含有一种或多种外源序列插入选定靶基因座第一等位基因内的细胞，以获得单等位基因靶向整合(TI)的植物细胞；
(iii)鉴定在选定靶基因座的第二等位基因处包含NHEJ介导的缺失的(ii)所得细胞，以获得NHEJ/TI植物细胞；
(iv)将(iii)所得NHEJ/TI植物细胞生长至繁殖上成熟的植物；
(v)将(iv)所得植物通过自花授粉杂交；以及
(vi)鉴定(v)的通过自花授粉杂交的、就靶向基因修饰而言纯合的子代，以获得NHEJ/NHEJ或TI/TI子代。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，编码所述核酸酶的多核苷酸被引入植物细胞。
3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述外源序列不含报道基因。
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