[发明专利]皮肤免疫用方法和组合物

说明书

本申请为国际申请PCT/FR2008/052198于2010年6月2日进入中国国家阶段、申请号为200880118865.0、发明名称为“皮肤免疫用方法和组合物”的分案申请。

技术领域

本发明涉及通过皮肤途径递送疫苗的方法和系统的开发。本发明更特别地涉及包含用于表皮(epicutaneou)接种的冷凝隔室的装置的应用。本发明还涉及可以在无需任何皮肤处理的条件下即获得有效的免疫应答的表皮接种方案。本发明还可用于任何哺乳动物中，优选用于人类，以诱导抗任何类型的抗原的治疗性或预防性免疫应答。

背景技术

大多数病原体通过粘膜或皮肤进入体内。皮肤，如粘膜，因此具有发觉病原体和自身防护所需的所有工具。这道防线特别地包括一支专职性的、驻留的抗原递呈细胞(Langerhans cells，APCs)队伍。在正常情况下存在于表皮中的唯一的APCs是郎格罕氏细胞(LC)，其是来自骨髓的树突状细胞(DC)。在捕捉抗原后，活化的LCs移动到引流淋巴结中，在那里它们启动强大的全身免疫应答。因此，对于通过传统注射给药途径来开发更有效的疫苗而言，皮肤代表了潜在的替代方法。另外，皮肤免疫系统还可以是用于诱导在不同病变诸如自身免疫疾病、过敏性和可能还有癌症中的耐受性的理想靶标。

然而，角质层(SC)，即皮肤的最顶层，是对抗流体、大分子(多肽和蛋白质)、或粒子乃至微生物进入的有效的物化屏障。已经测试了许多技术以致力于经由表皮途径、即通过向皮肤施用抗原获得有效的免疫应答。这些技术全部都涉及角质层的物理破坏，例如，轻度或中度 磨损(在敷用胶条或使用砂纸后)，通过应用超声或微针。这些不同的技术在或大或小的程度上都表现出作为抗原施用前的先行步骤的效力，用于促进抗原进入包含免疫细胞的皮肤表层(表皮)，和诱导免疫应答。例如，已显示向先前已经过磨损的皮肤共同施加抗原和佐剂诸如霍乱毒素(CT)或大肠杆菌的不稳定毒素(LT)有效产生免疫抗体应答(Glenn GM,Rao M,Matyas GR,Alving CR.Skin immunization made possible by cholera toxin.Nature.1998.391:851；Glenn GM,Scharton–Kersten T,Vassell R,Matyas GR,Alving CR.Transcutaneous immunization with bacterial ADP–ribosylating exotoxins as antigens and adjuvants.Infect Immun.1999.67:1100–6.)。另一方面，在施加抗原之前皮肤仅仅水合，无论是否随后进行封闭性处理，都决不引起特异性抗体应答。其仅能在皮肤先前经处理，导致角质层的物理扰动，或者如果抗原与强力的佐剂(CT或LT)共同给药下获得。

其它工作后来显示出，使用封闭系统将疫苗制剂保持就位，以液体形式在动物皮肤上沉积1-24小时的时段，使得只有在皮肤处理后方可在动物或在人中诱导免疫应答。然而，使用0-24小时的接触时间诱导的应答，在质和/或量上没有变化。

在WO 2004/03069申请中，其设想了借助于包含抗原和免疫刺激化合物的干形式的组合物，使用PosIntro或ISCOM系统诱导免疫应答。

在国际申请WO 2007/122226中还提议使用皮肤贴片以获得免疫应答。然而，该文献中所述的方法采用佐剂。

因此，如果没有任何先行的物理或物化处理(砂纸，乙醇，丙酮，胶条，甘油)或使用强力的佐剂(LT或CT)或其它促进性赋形剂的话，不能检测到抗原特异性抗体应答。

发明内容

本发明首次描述了能够通过皮肤途径诱导抗原特异性免疫应答而无需使用佐剂(CT或LT)或预处理或穿刺皮肤的方法。更具体地说，本发明描述了即使在缺乏任何佐剂下也是有效的表皮接种方法，该方法基于在允许形成冷凝隔室的条件下被施用于皮肤的干疫苗制剂的应用。本发明表明了产生和维持皮肤水合导致SC扰动，允许抗原通过。另外，水积聚在递送系统下，允许了干疫苗制剂再水合和溶解并开始与接触皮肤。我们在临床前试验中已显示了，与目前为止所述的不同的皮肤系统相反，本发明允许在没有共同给药任何佐剂(CT或LT类型)和无任何皮肤准备(磨损或穿刺)的条件下，诱导免疫原特异性抗体应答。在特别值得注意的方式中，本发明能够在无任何积极处理的条件下进行大分子(主要是多肽和蛋白质)的皮肤转运，这是现有技术所从未描述过的。如实施例中所阐述的，在使用本发明的方法三次施用疫苗之后，观察到特别强的免疫应答。