[发明专利]猪传染性胃肠炎病毒N基因RT-qPCR检测方法及其引物和TaqMan探针

权利要求书

1.一组猪传染性胃肠炎病毒N基因的引物和TaqMan探针，包括：

如序列表SEQ ID No.1所示的猪传染性胃肠炎病毒N基因的上游引物；

如序列表SEQ ID No.2所示的猪传染性胃肠炎病毒N基因的下游引物；

如序列表SEQ ID No.3所示的猪传染性胃肠炎病毒N基因的TaqMan探针序列。

2.如权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒N基因的引物和TaqMan探针，其特征在于，所述TaqMan探针序列的5’端标记报告荧光基团为FAM，3’端标记淬灭荧光基团为TAMRA。

3.一种猪传染性胃肠炎病毒N基因的RT-qPCR检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1所述的猪传染性胃肠炎病毒N基因的上游引物、猪传染性胃肠炎病毒N基因的下游引物以及猪传染性胃肠炎病毒N基因的TaqMan探针。

4.如权利要求3所述的RT-qPCR检测试剂盒，其特征在于，还包括：

1)阴性对照；

2)阳性标准质粒：由猪传染性胃肠炎病毒N基因克隆到质粒载体pMD18-T上而获得。

5.利用权利要求4所述的RT-qPCR检测试剂盒非诊断性检测猪传染性胃肠炎病毒N基因的方法，包括以下步骤：

1)提取样品RNA；

2)对提取样品的RNA进行RT-qPCR扩增；

3)根据RT-qPCR反应体系的荧光信号进行结果判定。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：

步骤2)中，RT-qPCR扩增反应体系：2×One Step RT-PCR Buffer Ⅲ 12.5μL，Ex Taq HS 0.5μL，RT Enzyme Mix Ⅱ 0.5μL，SEQ ID No.1所示的上游引物0.75μL，SEQ ID No.2所示的下游引物0.75μL，SEQ ID No.3所示的探针0.25μL，模板2μL，补DEPC水至25μL。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤2)中，RT-qPCR扩增反应条件：42℃5min，95℃10s；然后按95℃10s，57.5℃10s，60℃35s并收集荧光，进行40个循环。

8.如权利要求5所述的方法，其特征在于：步骤2)中，RT-qPCR扩增反应条件：升降温速度均设置为20℃/s。