[发明专利]哺乳动物表达载体

权利要求书

1.一种包含以下调控元件的哺乳动物表达载体：

(a)SV40增强子/早期启动子区和

(b)Hbb内含子II，

其中所述载体可通过将在(a)和(b)中定义的调控元件的控制下的至少一个目的基因插入显示9555bp的序列的pDGPΔGOI载体获得，所述pDGPΔGOI载体的一条链由SEQ ID NO:2表示，其中所述调控元件和目的基因的顺序如下：5’-SV40增强子/早期启动子区，Hbb内含子II，目的基因-3’。

2.权利要求1的载体，其中所述载体为环形。

3.权利要求1或2的载体，其中所述至少一个目的基因编码免疫球蛋白轻链和/或免疫球蛋白重链。

4.权利要求3的载体，其中所述载体还包含至少一种编码真核和/或原核选择标记的基因并且所述调控元件，目的基因和编码选择标记的基因的顺序如下：5'-SV40增强子/早期启动子区，Hbb内含子II，编码免疫球蛋白轻链的基因，SV40多聚腺苷酸化信号序列；SV40增强子/早期启动子区，Hbb内含子II，编码免疫球蛋白重链的基因，SV40多聚腺苷酸化信号序列；SV40增强子/早期启动子区，Tn5新霉素磷酸转移酶基因，合成的多聚腺苷酸化信号序列；SV40早期启动子，二氢叶酸还原酶基因，SV40多聚腺苷酸化信号序列-3'。

5.一种载体系统，其包含至少两个如在权利要求1中定义的载体，其中所述至少两个载体各自包含至少一个目的基因。

6.权利要求5的载体系统，其中位于第一个载体上的第一个目的基因编码免疫球蛋白轻链，位于第二个载体上的第二个目的基因编码免疫球蛋白重链。

7.一种载体系统，其包含至少两个载体，其中第一个载体可通过将在SV40增强子/早期启动子区和Hbb内含子II的控制下的至少一个目的基因插入显示3830bp序列的pDGP-AΔGOI载体获得，所述pDGP-AΔGOI载体的一条链由SEQ ID NO:3表示，其中所述调控元件和目的基因的顺序如下：5’-SV40增强子/早期启动子区，Hbb内含子II，目的基因-3’，并且其中第二个载体包含编码赋予转染细胞抗性的选择标记的至少一种基因。

8.哺乳动物细胞，其包含权利要求2至4中任一项的表达载体或包含权利要求5至7中任一项的载体系统。

9.权利要求8的细胞，其中所述细胞为COP细胞、L细胞、C127细胞、Sp2/0细胞、NS-0细胞、NS-1细胞、NIH3T3细胞、PC12细胞、PC12h细胞、BHK细胞、CHO细胞、COS1细胞、COS3细胞、COS7细胞、CV1细胞、Vero细胞、HeLa细胞、HEK-293细胞、PER C6细胞，或来自二倍体成纤维细胞、骨髓瘤细胞和HepG2的细胞。

10.一种产生权利要求9的细胞的离体方法，所述方法包括对哺乳动物细胞提供权利要求2至4中任一项的表达载体或权利要求5至7中任一项的载体系统的步骤。

11.一种生产至少一种目的多肽的离体方法，其中所述方法包括在允许表达所述至少一种目的多肽的条件下在细胞培养基中培养权利要求8的细胞的步骤。

12.权利要求11的方法，其中所述至少一种目的多肽被分泌至细胞培养基并且所述方法还包括从细胞培养基中分离所述至少一种目的多肽的步骤。