[发明专利]壁虎蛆虫蛋白质在制备抗鼻咽癌药品中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种壁虎蛆虫蛋白质的新用途，尤其是壁虎蛆虫蛋白质在制备抗鼻咽癌药品中的应用。

背景技术

鼻咽癌是原发于鼻炎粘膜被覆上皮的恶性肿瘤。分子遗传学研究表明，鼻咽癌肿瘤细胞发生染色体变化的主要是1，3，11，12和17号染色体。在鼻咽癌肿瘤细胞中发现多染色体杂合性缺失区（1p、9p、9q、13q、14q和16q），提示鼻咽癌发生发展过程中存在多个肿瘤抑癌基因的变异。

鼻咽癌的治疗方法有放射治疗、化学治疗、手术治疗及中医治疗。其中，放射治疗是常用的治疗鼻咽癌的方法，不能放射治疗的晚期鼻咽癌或放射治疗后复发的鼻咽癌可选用化学药物治疗。此外，化学药物治疗也可以作为放射治疗或手术治疗的辅助性治疗。鼻咽部解剖结构特殊，手术治疗难以切除全部病灶。中医药治疗传统上作为辅助治疗手段，只有不能放疗、化疗或手术治疗的患者才以中医药辨证治疗为主。

CN102526703A公开了一种鼻咽癌相关易感基因YH1蛋白的制备方法及其应用，改方法公开了所述YH1蛋白制备方法包括表达载体构建、表征工程菌的构建及诱导表达、纯化和酶切。

CN103520177A公开了一种化合物在制备治疗鼻咽癌药物中的应用，该发明中的化合物为AsperterpenolsA是一种原治疗老年痴呆病的药物开展的新用途。

CN102766215A公开了一种具有协同靶向诊疗鼻咽癌功能的多肽和携带此多肽的纳米颗粒及其应用。该发明提供的具有协同靶向治疗鼻咽癌功能的多肽由具有靶向治疗鼻咽癌作用的多肽，连接序列肽以及具有α螺旋结构的鼻咽癌靶向治疗多肽以共价键的形式串联而成，其纳米颗粒是由多肽磷脂、胆固醇脂或装载物组成。

CN101683439A公开了一种治疗鼻咽癌的中药制剂，该制剂由白英、野菊花、臭牡丹、三颗针、苦参、白头翁、七叶一枝花、白花蛇舌草组成。

CN102516388A公开了一种人源抗鼻咽癌LMP1胞外区抗体及其应用，该发明中抗体的轻链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO.1，重链可变区氨基酸序列为SEQ ID NO.2。

201210315707.2公开了人工培殖壁虎蛆虫的工艺，该发明以壁虎等为原料，配制成适宜的培养基，培殖出药用壁虎蛆虫，该虫体具有较高生物活性，可以抗鼻咽癌。

发明内容

本发明的目的是提供一种壁虎蛆虫蛋白质在制备抗鼻咽癌药品中的应用，根据鼻咽癌的病灶特性及壁虎蛆虫蛋白质生物活性特点，两者相结合制备的药剂具有适应性强、疗效好的特点。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

（1）将1000g壁虎蛆虫在常温膨化装置（200520108339.X）中常温条件下膨化粉碎。

本步骤中，所述膨化压力为0.1~5MPa，时间为10~60min。

（2）膨化粉碎后的物料加入到膨胀溶剂体系提取装置（201210179076.6）中，加入膨胀溶剂并加压至2~10MPa，形成膨胀溶剂体系，提取出壁虎蛆虫蛋白质粗品。

本步骤中，所述膨胀溶剂由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL甲醇及100~300gNH₃·H₂O组成或由1~10Kg液态二氧化碳、100~500mL乙醇及100~300g氯化铵组成。

本步骤中，所述提取温度为10~20℃，时间为10~30min。

（3）收集含有壁虎蛆虫蛋白质粗品的溶液并且用微孔过滤器过滤去掉杂质。

本步骤中，所述微孔过滤器的孔径为0.5~50μm。

（4）用超滤机超滤处理，收集含有相应分子量的壁虎蛆虫蛋白质超滤溶液。

本步骤中，所述超滤机的孔径为50~100nm。

（5）超滤液溶解在适宜的溶剂中用固相萃取柱分离，收集洗脱成分。

本步骤中，所述溶剂为乙腈。

（6）将洗脱成分溶解在合适的溶剂体系中，用超声驻波液相制备色谱（200920274485.8）分离纯化。

本步骤中，所述溶剂体系由正丁醇-乙酸乙酯-水（体积比1.25:3.75:5）组成或4.5%聚乙二醇-7%葡聚糖T500（重量比）组成。

（7）纯化后的壁虎蛆虫蛋白质用真空冷冻干燥机制备成冻干蛋白粉。

本步骤中，所述真空冷冻干燥温度为-30~50℃、时间为18~26h。

（8）赋予不同的药用辅助材料，可用于制备抗鼻咽癌药品。