[发明专利]一种同时检测蓝狐、貉和犬物种成分的引物组及其应用

权利要求书

1.一种同时检测蓝狐、貉和犬物种成分的引物组，其特征在于，所述蓝狐物种成分引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.2所示；所述貉物种成分引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-SEQ ID NO.4所示；所述犬物种成分引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.6所示。

2.权利要求1所述引物组，其特征在于，所述蓝狐物种扩增产物的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述貉物种成分扩增产物的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述犬物种成分扩增产物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

3.权利要求1所述引物组用于肉制品、饲料和毛皮产品中蓝狐、貉和犬物种成分的检测。

4.一种利用权利要求1所述引物组同时检测蓝狐、貉和犬物种成分的方法，其特征在于，通过提取待测样品DNA，以SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示蓝狐特异性引物对序列、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示貉特异性引物对序列、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示犬特异性引物对序列为引物，进行PCR扩增，最后对扩增产物进行电泳检测和/或序列分析。

5.权利要求4所述方法，其特征在于，所述待测样品DNA为线粒体基因组DNA。

6.权利要求4所述方法，其特征在于，所述蓝狐特异性引物，扩增目标的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示；所述貉特异性引物，扩增目标的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示；所述犬特异性引物，扩增目标的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示。

7.权利要求4所述方法，其特征在于，所述PCR扩增，反应体系为50μL：DNA模板3μL；上游引物和下游引物各1.0μL；rtaq mix 2x酶25μL，纯水25μL；PCR反应程序为：预变性：94℃，3min；进入循环：94℃变性60s，58℃退火60s，72℃延伸60s，35次循环；终止延伸：72℃，7min；4℃保存反应产物。

8.权利要求4所述方法用于肉制品、饲料和毛皮产品中蓝狐、貉和犬物种成分的检测。

9.一种含有权利要求1所述引物组的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括10×PCR缓冲液、10umol/L蓝狐物种成分正向引物、10umol/L蓝狐物种成分反向引物、10umol/L貉物种成分正向引物、10umol/L貉物种成分反向引物、10umol/L犬物种成分正向引物、10umol/L犬物种成分反向引物、10umol/L dNTP和5U/uLTaqDNA聚合酶；其中，蓝狐物种成分引物的正向引物如SEQ ID NO.1所示，蓝狐物种成分引物的反向引物如SEQ ID NO.2所示，貉物种成分引物的正向引物如SEQ ID NO.3所示，貉物种成分引物的反向引物如SEQ ID NO.4所示，犬物种成分引物的正向引物如SEQ ID NO.5所示，犬物种成分引物的反向引物如SEQ ID NO.6所示。

10.权利要求9所述试剂盒用于肉制品、饲料和毛皮产品中蓝狐、貉和犬物种成分的检测。