[发明专利]耐氧夏普氏菌及其在二氢大豆异黄酮有氧合成中的应用有效
| 申请号： | 201510094073.6 | 申请日： | 2015-03-03 |
| 公开（公告）号： | CN104673722B | 公开（公告）日： | 2017-07-11 |
| 发明（设计）人： | 王秀伶;谢雁景;杨露;赵慧 | 申请（专利权）人： | 河北农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12P17/06;C12R1/01 |
| 代理公司： | 石家庄国为知识产权事务所13120 | 代理人： | 李荣文 |
| 地址： | 071001 *** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 夏普 及其 大豆 异黄酮 有氧 合成 中的 应用 | ||
1.一种耐氧夏普氏菌（sharpea sp.）Aeroto-AUH-JLD21，保藏号为CGMCC No.9976。
2.如权利要求1所述的耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21在二氢黄豆苷原有氧合成中的应用。
3.根据权利要求2所述的耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21在二氢黄豆苷原有氧合成中的应用，其特征在于包括以下步骤：
（1）耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21的培养
将低温冷冻保存的耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21融化并按10～15% 接种量接种到添加0.05% L-半胱氨酸的BHI液体培养基中，37℃下活化培养18～24小时；再以10% 接种量将上述活化的耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21转接到新鲜BHI液体培养基中，培养4～8小时作为种子液；
（2）底物黄豆苷原与耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21共培养
将耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21的种子液按10～15% 接种量接种到添加0.10% L-半胱氨酸和0.10% 抗坏血酸的BHI液体培养基中，加入母液浓度为40～60毫摩尔/升的底物黄豆苷原，使底物黄豆苷原的终浓度为1.2～2.4毫摩尔/升，37℃恒温培养箱内培养1～2天；
（3）代谢产物的分离纯化
用等体积的乙酸乙酯将培养物萃取2次，萃取液过滤后蒸干，加入100%甲醇溶液，用制备柱在HPLC上进行分离得到代谢产物二氢黄豆苷原。
4.如权利要求1所述的耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21在二氢染料木素有氧合成中的应用。
5.根据权利要求4所述的耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21在二氢染料木素有氧合成中的应用，其特征在于包括以下步骤：
（1）耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21的培养
将低温冷冻保存的耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21融化并按10～15% 接种量接种到添加0.05% L-半胱氨酸的BHI液体培养基中，37℃下活化培养18～24小时；再以10% 接种量将上述活化的耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21转接到新鲜BHI液体培养基中，培养4～8小时作为种子液；
（2）底物染料木素与耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21共培养
将耐氧夏普氏菌Aeroto-AUH-JLD21的种子液按10～15% 接种量接种到添加0.10% L-半胱氨酸和0.10% 抗坏血酸的BHI液体培养基中，加入母液浓度为40～60毫摩尔/升的底物染料木素，使底物染料木素的终浓度为1.2～2.4毫摩尔/升，37℃恒温培养箱内培养1～2天；
（3）代谢产物的分离纯化
用等体积的乙酸乙酯将培养物萃取2次，萃取液过滤后蒸干，加入100%甲醇溶液，用制备柱在HPLC上进行分离得到代谢产物二氢染料木素。
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