[发明专利]人睫状神经营养因子突变体、生产方法及用途

权利要求书

1.一种人睫状神经营养因子突变体，其特征在于，是如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.一种人睫状神经营养因子的突变体的基因，其特征在于，其

编码如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，所述的编码如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的蛋白质的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一种包含如权利要求2所述的人睫状神经营养因子的突变体的基因的重组载体。

5.一种包含如权利要求4所述的重组载体的转化体。

6.如权利要求5所述的转化体，其特征在于，所述的转化体的宿主微生物为E.coli BL21。

7.一种人睫状神经营养因子的突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：培养如权利要求5所述的转化体，从培养液中获得人睫状神经营养因子的突变体。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的培养的方法包括以下的步骤：将所述转化体接种至培养基中培养，加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷进行诱导表达，获得培养液；所述的从培养液中获得人睫状神经营养因子的突变体的方法包括以下的步骤：离心收集所述培养液中的菌体，重悬菌体，高压均质破碎菌体，离心收集包涵体，将所述包涵体用含盐酸胍缓冲液溶解变性，得到包涵体变性液，通过稀释复性方法将包涵体蛋白复性，用切线流系统进行浓缩后再用置换缓冲液进行透析置换得到所述人睫状神经营养因子的突变体的粗品，所述置换缓冲液包括50mMTris-HCL和1mM EDTA，pH8.0，所述切线流系统为购自Millipore的Labscale TFF System；和/或，还包括从所述的粗品中获得所述人睫状神经营养因子的突变体的步骤：将所述人睫状神经营养因子的突变体的粗品用阴离子交换柱进行层析纯化，再将目的蛋白人睫状神经营养因子的突变体用疏水层析柱进行精细纯化，收集目的蛋白峰，经滤膜过滤除菌后，得到人睫状神经营养因子的突变体的纯品。

9.一种如权利要求1所述的人睫状神经营养因子的突变体在制备治疗肥胖症药物中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的肥胖症为普通肥胖症或者糖尿病型肥胖症。