[发明专利]强化植物修复土壤重金属污染的光合菌制剂及其制备方法

权利要求书

1.强化植物修复土壤重金属污染的光合菌制剂，其特征在于：

由紫硫光合细菌中的桃红荚硫菌与紫色非硫光合细菌中的荚膜红假单胞菌混合发酵制成；

采用紫硫光合细菌中的桃红荚硫菌与紫色非硫光合细菌中的荚膜红假单胞菌按以下步骤进行培养：

桃红荚硫菌半固体种子活化培养：将桃红荚硫菌菌种穿刺在半固体桃红荚硫菌培养基中，25-30℃光照培养7-10天，待穿刺的菌线变红并长出菌苔，即可为活化的桃红荚硫菌菌种；

荚膜红假单胞菌平板活化：将荚膜红假单胞菌菌种在荚膜红假单胞菌平板固体培养基上划线活化，温度25-35℃活化培养3-5天，挑取大个菌落作为活化种子；

桃红荚硫菌种子培养：将活化的菌种接种至桃红荚硫菌种子液体培养基中，温度25-35℃，光照强度为：1000-3000lux，光照厌氧培养7-10天，检测种子的OD650≥1.2，活菌数≥6亿个/毫升即为种子培养液；

荚膜红假单胞菌种子培养：将挑取大个荚膜红假单胞菌菌落作为活化种子接种到荚膜红假单胞菌种子液体培养基中，温度25-35℃，光照强度为：1000-3000lux，光照静置培养3-5天，检测种子的OD660≥2，活菌数≥15亿个/毫升即为种子培养液；

发酵培养：将桃红荚硫菌种子培养液与发酵培养基以1：3-1：5的接种量接种，同时将荚膜红假单胞菌种子培养液与发酵培养基按1：10-1：20的接种量接入，在光照培养罐中厌氧培养，培养温度25-35℃，光照强度为：1000-4000lux，搅拌速度为120转/分钟，待培养至第二天，开始流加300g/L的硫代硫酸钠至硫代硫酸钠的浓度至1-2g/L，培养5-7天，待检测其OD650≥6，活菌数≥50亿个/毫升，其中桃红荚硫菌不低于25亿/毫升，荚膜红假单胞菌不低于20亿/毫升，即可放罐，灌装，包装成品。

2.根据权利要求1所述的强化植物修复土壤重金属污染的光合菌制剂，其特征在于所述的半固体桃红荚硫菌培养基为：硫酸铵1-2g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，硫酸镁0.1-0.5g/L，醋酸钠2-5g/L,果糖2-5g/L，九水硫化钠0.1-1g/L，琼脂8-10g/L，氯化钠0.5-4g/L,121℃灭菌15分钟，用苹果酸调PH至7.0-7.2，其中九水硫化钠先配制成0.1g/mL单独灭菌。

3.根据权利要求1所述的强化植物修复土壤重金属污染的光合菌制剂，其特征在于所述的桃红荚硫菌种子液体培养基为：硫酸铵1-2g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，硫酸镁0.1-0.5g/L，醋酸钠2-5g/L,果糖2-5g/L，九水硫化钠0.1-1g/L，氯化钠0.5-4g/L，121℃灭菌15分钟，用醋酸调PH至7.0-7.2,其中九水硫化钠先配制成0.1g/mL单独灭菌。

4.根据权利要求1所述的强化植物修复土壤重金属污染的光合菌制剂，其特征在于所述的荚膜红假单胞菌种子液体培养基为:硫酸铵1-2g/L，磷酸二氢钾0.5-1g/L，二水氯化钙0.05-0.2g/L，硫酸镁0.1-0.5g/L，醋酸钠2-5g/L,果糖1-3g/L，氯化钠1-2g/L,生物素0.1-0.5mg/L，121℃灭菌15分钟，用灭菌醋酸调PH至7.0-7.2。

5.根据权利要求1所述的强化植物修复土壤重金属污染的光合菌制剂，其特征在于所述的荚膜红假单胞菌平板固体培养基为荚膜红假单胞菌种子液体培养基加入20g/L的琼脂形成的。

6.根据权利要求1所述的强化植物修复土壤重金属污染的光合菌制剂，其特征在于所述的发酵培养基：硫酸铵1.6g/L，磷酸二氢钾0.8g/L，二水氯化钙0.12g/L，硫酸镁0.2g/L，醋酸钠4g/L，果糖6g/L，生物素0.3mg/L,氯化钠1g/L，121℃灭菌15分钟，用醋酸调PH至7.0-7.2。

7.根据权利要求1所述的强化植物修复土壤重金属污染的光合菌制剂的使用方法，其特征在于：利用500倍光合菌制剂稀释液浸泡即将播种在含有重金属的土壤的植物种子30分钟，待种子发芽后，每隔30天灌根一次，每次用量为0.5mL-2mL光合菌制剂/Kg土；在每次灌根后的第15天，利用1000倍光合菌制剂稀释液叶面喷施一次。