[发明专利]出血热相关病原体鉴别基因芯片的制备和用途

说明书

本发明涉及一种出血热相关病原体鉴别基因芯片，其制备方法包括制备特异性引物，制备病原体特异性寡核苷酸探针，制备寡核苷酸芯片，建立RT‑PCR体系，建立杂交体系及信号检测方法。利用本发明制备的基因芯片可同时甄别16种出血热相关病原微生物，包括扎伊尔型埃博拉病毒、苏丹型埃博拉病毒、马尔堡病毒、拉沙病毒、鸠宁病毒、马秋波病毒、裂谷热病毒、克里米亚‑刚果出血热病毒、疟原虫、汉坦病毒、发热伴血小板减少综合征病毒、登革病毒、黄热病毒、基孔肯雅病毒、A型流感病毒、B型流感病毒，具有快速、准确、高通量、高灵敏度的特点，可为出血热病原的诊断、卫生监督及传染病防控提供一种新的技术手段。

技术领域

本发明涉及十六种出血热相关病原体核酸检测基因芯片的制备和用途，属基因芯片检测技术领域。

背景技术

病毒性出血热(Viral Hemorrhagic Fever，VHF)是一组由不同类型病毒引起，以发热、出血为主要临床症状的一组自然疫源性疾病。出血热病毒主要分布在丝状病毒科(Filoviridae)、沙粒病毒科(Arenaviridae)、布尼亚病毒科(Bunyaviridae)和黄病毒科(Flaviviridae)。可引发出血热的病毒种类繁多，其中在全球范围内影响较大的包括：丝状病毒科埃博拉病毒、马尔堡病毒、沙粒病毒科拉沙病毒、鸠宁病毒、马秋波病毒、布尼亚病毒科裂谷热病毒、克里米亚-刚果出血热病毒、汉坦病毒、发热伴血小板减少综合征病毒、黄病毒科登革病毒、黄热病毒、披膜病毒科基孔肯雅病毒等。该类疾病发病初期的临床表现并不特异，类似流感、疟疾，常可发展到皮下、体腔和内脏出血，随之而来的是休克、昏迷和神经功能障碍等，病死率高，危害严重。

出血热病毒宿主和媒介类型广泛，传播方式多种多样，随着经济全球化的进展，各地区商贸往来和人员交流更加快捷频繁，宿主和媒介分布的地理界线被打破，从而导致疫情流行范围的扩大和突然暴发，也增加了发生输入性疫情的可能。2014年西非暴发的埃博拉出血热是由埃博拉病毒引起的急性出血性传染病，自2014年3月报告出现首批病例到12月24日共有19497人疑似或确认感染，导致7588人死亡，是1976年首次发现埃博拉病毒以来发生的最大且最复杂的埃博拉疫情，本次疫情出现的病例和死亡数字超过了所有其它疫情的总和。WHO已将埃博拉病毒列为对人类危害最严重的病毒之一，其平均病死率约为50％，在以往疫情中出现的病死率从25％到90％不等，目前发现有五个亚型，其中扎伊尔型和苏丹型病死率最高，分别可达88.8％和53.2％。2014年中国广东暴发登革热，至12月1日广东累计报告登革热病例45053例。据估计，全球每年实际感染登革病毒的病例高达3.9亿，其中超过2万人因严重感染而死亡。不仅既往发现的病毒疫情不时暴发，引起新发传染病的新病毒也不断被发现。2010年我国发现具有重要公共卫生意义的新型布尼亚病毒——发热伴血小板减少综合征病毒(Severe Fever with Thrombocytopenia Syndrome Virus，SFTSV)，该病毒感染人体引起的发热伴血小板减少综合征，是一种以发热伴白细胞、血小板减少和多脏器功能损伤为主要临床表现的新发传染病，死亡率高达30％。目前已在山东、湖北、浙江、江苏等多个省市发现SFTSV感染病例，2011-2013年，美国密苏里州、日本、韩国也相继报道发现有经蜱虫叮咬传播的类似SFTSV病毒感染病例，SFTSV感染已逐渐成为全球性的重要公共卫生问题。

由于病毒性出血热病死率高，传播途径广，极易造成社会恐慌，美国疾病预防控制中心将出血热病毒列为一类生物武器，因此病毒性出血热的防控和治疗手段显得尤为重要。但目前已商业化的出血热疫苗只有肾综合征出血热疫苗和黄热病疫苗，另外尚有阿根廷出血热疫苗和裂谷热疫苗处于临床试验阶段；在药物治疗方面，尚无针对病毒性出血热的特效药物。“诊”、“防”、“治”三个环节构成了完整的疾病预防控制链，其中“诊”不仅是其中不可缺少的关键一环，而且也是有效防治的前提。在病毒性出血热的高发和临床治疗手段的缺乏情况下，准确有效的诊断病原体显得尤为重要。