[发明专利]编码N-甲基腐胺氧化酶之核酸及其应用

权利要求书

1.一种减少植物中的生物碱的方法，所述方法包括相对于对照植物下调内源性MPO基因的N-甲基腐胺氧化酶MPO的表达，其中，所述方法包括：

(a)在所述植物中引入核酸，所述核酸包含：

(i)RNAi质粒或病毒诱导的基因沉默载体中的至少一种；以及

(ii)选自下列的核苷酸序列：

(1)SEQ ID NO:1的核苷酸754-1132；

(2)SEQ ID NO:1的核苷酸1521-1772；

(3)SEQ ID NO:1的核苷酸1129-1405；

(4)SEQ ID NO:1；以及

(5)SEQ ID NO:2；以及

(b)使植物在使所述核苷酸序列被转录的条件下生长，并且由此所述转录导致所述植物中的生物碱的水平相对于在相似条件下生长的对照植物降低。

2.如权利要求1所述的方法，其中，所述方法还包括下调NBB1、A622、QPT和PMT中的至少一个。

3.如权利要求1所述的方法，其中，所述生物碱是吡咯烷类生物碱。

4.如权利要求3所述的方法，其中，所述吡咯烷类生物碱是烟碱。

5.如权利要求1所述的方法，其中，所述植物是菸草。

6.一种减少植物种群中的吡咯烷类生物碱的水平的方法，所述方法包括：

(a)提供突变的植物种群；

(b)检测所述植物种群内的靶向突变植物，其中与相似条件下提供的对照植物相比,所述靶向突变植物的N-甲基腐胺氧化酶基因表达降低，或N-甲基腐胺氧化酶的活性降低，所述检测包括：

(i)利用根据SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2设计的引物对突变植物种群中突变植物中的N-甲基腐胺氧化酶基因区域进行PCR扩增，

(ii)识别在被扩增区域和野生型基因的相应区域之间导致N-甲基腐胺氧化酶基因的表达降低或N-甲基腐胺氧化酶的活性降低的错配，以及

(iii)识别含有所述错配的突变植物；和

(c)选择性培育所述靶向突变的植物，以产生下述植物种群：其与相似条件下产生的对照植物种群相比，N-甲基腐胺氧化酶基因的表达降低或N-甲基腐胺氧化酶的活性降低。

7.如权利要求6所述的方法，其中，所述吡咯烷类生物碱是烟碱。

8.如权利要求6所述的方法，其中，所述植物是菸草。

9.一种由权利要求1至8中任一项所述的方法制备的植物生成的生物碱减少的植物产品，其中，所述植物产品不具有发育成完整植株的能力。

10.如权利要求9所述的生物碱减少的植物产品，其中，所述产品是烟草产品。

11.如权利要求10所述的生物碱减少的植物产品，其中，所述生物碱减少的烟草产品选自：戒烟产品、卷烟、卷烟烟叶、雪茄、雪茄烟叶、烟斗烟叶、嚼烟、鼻烟叶、唇齿烟和烟草含片。

12.一种增加植物中生物碱水平的方法，所述方法包括：

(a)在所述植物中引入编码MPO酶的核苷酸序列，其中，所述核苷酸序列选自：SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2；以及

(b)在与相似条件下生长的对照植物相比使所述植物产生提高的MPO水平的条件下使所述植物生长。

13.如权利要求12所述的方法，所述方法还包括在所述植物中引入编码选自NBB1、A622、QPT和PMT中的至少一种酶的核苷酸序列。

14.如权利要求12所述的方法，其中，所述植物是茄科或古柯科植物。