[发明专利]一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法

权利要求书

1.一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）组培苗的生根：取高3～5cm高，生长健壮的南高丛越橘组培苗接种到生根培养基中进行诱导生根,接种后先在25～28℃条件下全暗培养10～20天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养至生根；

（2）炼苗移栽：根长至1～2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗2～4天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入微酸性基质中并定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上；

（3）多倍体诱导：将步骤（2）精心管理待其正常生长45～60天后，选择茎尖生长旺盛的幼苗作为活体诱导材料,在幼苗生长旺盛的时段，用脱脂棉包裹其新芽,然后用不同浓度的诱变剂对其进行滴定处理12～48h,为防止其蒸发,用透明小拱棚遮盖幼苗,正常光照,并每隔3～6h滴定一次,保持脱脂棉湿润,处理后除去脱脂棉,揭开小拱棚,用清水冲洗幼苗5～10次,洗掉残余药液,在正常条件下进行田间管理；

（4）芽体生根：将步骤（3）处理的芽长到3～5cm的枝条进行形态鉴定，并取茎尖旁幼叶用去壁低渗-火焰干燥法对其进行染色体计数,同时剪取其枝条,扦插于微酸性基质中，扦插1个月内保持空气湿度90%以上，芽体开始生根，生出新芽后，取新芽旁边的幼叶进行染色体计数,统计变异率及多倍体比例。

2.  根据权利要求1所述的一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（1）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～3.0mg/L NAA+1.0～2.0mg/L ABT₁+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

3.   根据权利要求1所述的一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（1）、（4）所述的微酸性基质指的是由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1组成的、pH为5.4～5.8的基质。

4.根据权利要求1所述的一种活体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（4）所述的诱变剂是指浓度为0.1%～0.4%的秋水仙素溶液。