[发明专利]一种离体诱导南高丛越橘四倍体的方法

权利要求书

1.一种离体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）增殖培养：将生长健壮的南高丛越橘组培苗茎尖剪切并接种到继代培养基中进行增殖培养,接种后先在25～28℃条件下全暗培养2～5天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，每20天继代一次，以获得更多的丛生芽；

（2）多倍体诱导：剪取步骤（1）培养获得的丛生芽带叶茎尖（约0.5cm），浸泡在经过抽滤灭菌的秋水仙素溶液中，在摇床中以100～300r/min的速度震荡处理12～48h,然后无菌水冲洗3～5次后接种至诱导培养基中进行多倍体诱导培养,接种后先在25～28℃条件下全暗培养20～30天，然后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养；

（3）嵌合体分离：将步骤（2）获得的变异植株枝条剪下,进行组织培养,将恢复生长的嵌合体枝条分切成带芽小段并接种到增殖培养基上分离培养,如此重复切割增殖培养几代,再进行倍性检测,直到得到四倍体植株为止；

（4）生根培养：将步骤（3）获得的经形态鉴定、染色体计数确认已为四倍体的变异萌枝剪切并接种至生根培养中诱导生根,接种后置于每天光照14～16小时，光照强度为3000～5000lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至生根；

（5）炼苗移栽：根长至1～2cm试管苗的培养瓶瓶盖打开在室外于自然光照下炼苗2～4天后将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，尽量不伤害根部，栽入微酸性的由腐殖土:椰糠:稻谷＝3：1:1组成基质中并定植于大田中，移栽1个月内保持空气湿度80%以上。

2.    根据权利要求1所述的一种离体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（1）、（3）所述的增殖培养基为：WPM+0.1～2.0mg/L ZT+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

3.根据权利要求1所述的一种离体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（2）所述的秋水仙素深夜是指浓度为0.05%～0.2%的秋水仙素溶液。

4.根据权利要求1所述的一种离体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（2）所述的诱导培养基为：WPM+0.1～2.0mg/L ZT+10～30mg/L秋水仙素+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。

5.   根据权利要求1所述的一种离体诱导南高丛越橘四倍体的方法，其特征在于步骤（4）所述的生根培养基为：1/2MS+1.0～3.0mg/L NAA+1.0～2.0mg/L ABT₁+15～30g/L蔗糖+3.5～6.0g/L琼脂，pH为5.4～5.8。