[发明专利]一种猕猴采精方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种猕猴采精方法。

背景技术

电刺激采精法是目前国内外应用最广泛的猕猴精液采集方法，分为阴茎电刺激法和直肠探子法两种。传统电刺激采精法需要麻醉，会对采精造成一定的影响且造成相当的安全风险。另外在电刺激采精的过程中容易对动物的身体造成伤害和痛苦，因而不完全符合动物福利的要求。当前振动法采精技术已经在人类和狨猴上取得了成功，此技术具有非麻醉、操作简便、采精效率高以及无创伤、无痛苦等优点，被认为是一种良好的采精方法。但由于猕猴属动物性格敏感，在非麻醉状态下警觉性强且具有较强的攻击性，因此之前一直没有猕猴成功使用非麻醉的采精技术采集精液的报道。

发明内容

本发明的目的为消除电刺激采精技术对猕猴造成的伤害和不良影响，提供一种猕猴采精方法。所述的采精方法适用于食蟹猴、恒河猴等猕猴属非人灵长类动物的精液采集。所述的采精技术操作时不需要对猕猴进行麻醉，避免了由麻醉引起的安全风险和对采精的不良影响。通过训练使猕猴在非麻醉的保定过程中处于温顺的低应激状态。非电脉冲刺激，在采精过程中基本无创伤，也不会对动物造成明显的痛苦。同时通过本技术采集的精液的品质比传统方法所采集的精液好。

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种猕猴采精方法，该方法采用振动采精仪一台，振动接触棒，消毒过的离心管，移液器，镊子一把，恒温水浴锅一个，猴颈圈一个，猴椅一台，采精方法运用非麻醉保定方法振动刺激采精，具体操作步骤如下：

1)将经过适应训练的佩戴了猴颈圈的猕猴置于猴椅上，把猴颈圈固定于相应的卡槽中，猕猴面向前方，暴露生殖器部位，实现猕猴的保定；

2)猕猴保定好后，用温生理盐水润湿的无菌棉小心擦洗猕猴的阴茎龟头部，防止精液被污染；

3)用镊子夹持一个灭菌擦拭物，在龟头和阴茎根部间反复轻轻擦拭1～2min；

4)采用振动采精仪对猕猴进行刺激，采精仪的振动幅度始终设置为3mm，先以频率90Hz，用振动接触棒以打圈的方式刺激猕猴的阴囊中线部位和附睾，刺激时间为5min；然后以频率100Hz，以阴茎为中心，以打圈的形式刺激周围的部位，刺激时间为3min；最后以频率110～120Hz,集中刺激阴茎体部和包皮结合处，刺激时间为2min；整个刺激过程中，采精仪都不接触龟头；

5)猕猴射精后，将胶块部分转移到离心管中，液体部分用移液枪移吸取也转移到离心管中，获得猕猴精液；然后置于37℃的恒温水浴锅中备用，猕猴采精频率每周最多2次，注意适当补充营养。

步骤1)中所述的适应训练为：实验前1～2周开始为需要进行采精的猕猴佩戴猴颈圈；佩戴猴颈圈后，每天把猕猴安置到猴椅上进行保定，保定时间从5min开始，并不断延长至30min，保定结束后把猕猴放回笼子里；保定的操作每天重复3～4次，保定前后和过程中都给猕猴喂吃新鲜水果或者坚果作为奖励，使猕猴消除对保定的恐惧和反抗；使猕猴都能在低应激状态下接受猴椅保定，且不会有明显的反抗和攻击行为。

所述的猕猴为猕猴属非人灵长类动物，优选为食蟹猴或恒河猴。

步骤1)过程中猕猴若出现排尿，立即用温生理盐水润湿的无菌棉球擦洗干净。

步骤3)中所述的灭菌擦拭物为灭菌棉球或灭菌绒布中的一种。

步骤3)中的擦拭过程中若猕猴有射精即可停止，收集精液。

步骤4)中若猕猴没有射精，则略作休息后，重复步骤4)一次，累计刺激时间不超过20min；若累计刺激时间超过20min没有射精，可以认为这一次采精失败，休息一天再重复刺激。

步骤4)所述的振动接触棒由0.5ml或1.5ml的EP(eppendorf)管加工而成，具体为：把EP管的管盖去除，并把用于接触猕猴生殖器的管口端打磨光滑，EP管的底部外壁刻上螺纹后安装在振动采精仪的卡槽里。

通过训练使猕猴能在低应激水平下接受非麻醉保定；所用的猴椅和猴颈圈可以根据猕猴体重选择成不同型号；采精仪振动探头为改装的，可以根据需求不同做成适合需要的长度；采精的过程中猕猴的表现很安静舒适，不需要麻醉。

通过适应训练降低猕猴的应激水平，用猴椅和猴颈圈代替麻醉保定，由麻醉引起的安全风险和对采精的不良影响。使用振动刺激代替电脉冲刺激，因而在采精过程中不会造成创伤和疼痛。使采精过程，猕猴处于近似自然交配的状态，因此所采集的精液的品质也与自然射精无异，可以用于猕猴人工授精，精子冷冻保存，转基因和基因敲除猕猴的创制，生殖毒理学和生殖生物学研究，充分发挥优良雄性猕猴的繁殖效率，也有利于保存优良猕猴的遗传物质。