[发明专利]一种乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析检测技术领域，具体涉及一种乙酰酪氨酸及其光学异构体的高效液相色谱检测方法。

背景技术

N-乙酰-L-酪氨酸为重要的精细有机化工中间体，其化学结构式为：

N-乙酰-L-酪氨酸广泛应用于医药，农药，化学工业等领域，目前通常只对N-乙酰-L-酪氨酸的常规理化指标进行检测，但在生产过程中会产生副生物——N-乙酰-D-酪氨酸这一旋光异构体，从而影响产品质量。建立一种能准确测定乙酰酪氨酸及其旋光异构体含量的方法，将对其生产有重要指导意义。

HPLC在拆分氨基酸外消旋体时通常有三种方法：一是利用手性试剂与被拆分物进行衍生化反应生成非对映异构体，从而可被传统的非手性色谱柱所拆分；二是在流动相中加入手性添加剂，利用非手性固定相色谱柱进行拆分；三是利用手性固定相色谱柱进行拆分。其中衍生化反应操作复杂，衍生试剂和反应介质有可能干扰色谱分离和检测；手性流动相添加剂拆分机理较复杂，方法的建立较困难，更换流动相时系统较长时间才能平衡。而手性固定相色谱法虽然成本较高，但因其简单，快速和准确的优点，已成为分析和分离对映体的最常用的方法。

在多糖类衍生物手性固定相中，纤维素涂覆型手性色谱柱和直链淀粉类涂覆型手性色谱柱由于拆分范围广而得到广泛应用。两者的光学拆分能力不同，一些在纤维素上不能拆分的样品，在直链淀粉上却能够很好地拆分，反之亦然。

直链淀粉与5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯反应便可得到直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)，把得到的衍生物涂敷在γ-氨丙基键合硅胶上，便得到直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相。

发明内容

本发明的目的在于提供一种分析分离N-乙酰-L-酪氨酸及其对映异构体N-乙酰-D-酪氨酸的高效液相色谱方法，从而实现N-乙酰-L-酪氨酸与其对映异构体的分离测定。

发明人发现，采用直链淀粉类涂覆型手性色谱柱，以正相混合溶剂为流动相对乙酰酪氨酸的光学异构体进行分离检测，可以将N-乙酰-L-酪氨酸及其光学异构体进行有效分离，从而对N-乙酰-L-酪氨酸及其光学异构体进行定性、定量分析。本发明的方法能简单、快速、准确地分析分离N-乙酰-L-酪氨酸及其光学异构体杂质。

所述直链淀粉类涂覆型手性柱是以硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)为填料；所述正相混合溶剂为正己烷-无水乙醇，所述正己烷-无水乙醇的体积比为70～90∶10～30。

优选地，所述正己烷-无水乙醇的体积比为85∶15。

优选地，所述高效液相色谱检测有如下任选的色谱条件：

流动相流速为0.8～1.2ml/min，和/或

色谱柱温度为25～40℃，和/或

检测器采用紫外检测器，检测波长为210nm。

进一步优选地，所述流动相流速为1.0ml/min；色谱柱温度为40℃；检测器采用紫外检测器，检测波长为210nm。

优选地，所述检测方法包括供试品溶液的制备、对照品溶液的制备和测定三个步骤，

所述供试品溶液的制备包括：取乙酰酪氨酸或含乙酰酪氨酸的相关待测样品，用稀释液配制成浓度为0.25～1mg/ml的溶液，作为供试品溶液；

所述对照品溶液的制备包括：精密量取乙酰酪氨酸及其光学异构体对照品，分别用稀释液稀释，作为对照品溶液；

所述测定步骤包括：取对照品溶液20μl注入高效液相色谱仪，调节检测器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10～20％；再取供试品溶液20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图。

进一步优选地，所述稀释液为无水乙醇。

本发明采用硅胶表面涂敷有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱，采用HPLC法使N-乙酰-L-酪氨酸和N-乙酰-D-酪氨酸得到有效的分离，从而准确测出样品中N-乙酰-L-酪氨酸及其异构体的含量。本发明方法简便、可靠、迅速，灵敏度高，分离度、重现性好，结果准确可靠，可用于N-乙酰-L-酪氨酸的质量控制。

附图说明

图1是流动相为体积比为75:25的正己烷-无水乙醇的分离效果色谱图。

图2是流动相为体积比为80:20的正己烷-无水乙醇的分离效果色谱图。

图3是流动相为体积比为85:15的正己烷-无水乙醇的分离效果色谱图。

图4是待测样品含量测定的色谱图，其样品主峰N-乙酰-L-酪氨酸的出峰时间为6.34min，N-乙酰-D-酪氨酸的出峰时间为5.24min。