[发明专利]一种海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法

权利要求书

1.一种海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）海马前处理：将海马洗净冻好后，于-80 ℃下冷冻干燥48 h，再用粉碎机粉碎，然后采用CO₂超临界流体萃取技术脱除脂肪酸，得到脱脂海马粉；

（2）海马蛋白液制备：将步骤（1）得到的脱脂海马粉与水按40-60g/L的比例混合后，依次用胰蛋白酶和碱性蛋白酶酶解后，用滤纸过滤取上清液，即为海马蛋白酶解液；将海马蛋白酶解液用截留分子量为20KDa的超滤膜进行超滤，收集分子量大于20KDa的滤液，并进行浓缩和冷冻干燥得到海马蛋白粉；

 （3）ACE抑制肽制备：将步骤（2）中得到的海马蛋白粉与水按400-600g/L的比例混合后，加入海马蛋白粉质量5%的木瓜蛋白酶进行酶解，酶解温度为59 ℃，时间为7.5 h，pH为7.7，将酶解液沸水灭活10分钟后，于4000 rpm离心10 min，取沉淀冷冻干燥即得到海马ACE抑制肽粉末。

2.根据权利要求1所述的一种海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法，其特征在于步骤（1）中所述的CO₂超临界萃取技术进行脱脂的条件为：萃取温度为58℃、萃取压强为35MPa、静态萃取10min后调节CO2流量为15L/h、动态萃取时间为125min的萃取条件下对海马骨粉进行脱脂。

3.根据权利要求1所述的一种海马血管紧张素转化酶抑制肽的制备方法，其特征在于：步骤（2）中所述的胰蛋白酶的酶解条件为温度45 ℃、时间4 h、pH 8.8、添加质量为脱脂海马粉的4%；碱性蛋白酶酶解温度54.70℃、时间6 h、pH 9.0、添加质量为脱脂海马粉的为4%。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的一种海马ACE抑制肽的制备方法，其特征在于：所述的海马包括大海马、三斑海马、线纹海马、日本海马、刺海马。