[发明专利]作为乳腺癌辅助检测的lincRNA标记物及试剂盒、探针、芯片

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，具体的说，本发明涉及一组用于辅助检测乳腺癌的基因间长片段非编码RNA(lincRNA)标记物，该RNA(lincRNA)标记物是一类位于两个基因间区的非编码RNA，转录本长度超过200碱基的RNA，其长度介于200bp～100kb之间，此类ncRNA不具有编码蛋白质的功能；另外本发明还涉及检测该标记物的相关试剂盒、试剂盒中的探针或探针组合以及用于检测乳腺肿瘤或辅助检测乳腺肿瘤的生物芯片。

背景技术

乳腺癌是最常见的妇科恶性肿瘤，其发生率和致死率居各肿瘤之首。据统计，2013年美国的癌症统计研究报告中，大约有23.24万女性罹患乳腺癌，占女性所有新发恶性肿瘤的29％，占全部女性所患癌症总人数的29％，位列妇女恶性肿瘤的首位，有约4万人死于乳腺癌，占因癌症造成死亡的14％，在女性因癌症死亡率居第二位，仅次于肺癌。其中50％乳腺癌病例和60％因乳腺癌死亡均发生在经济发达国家。通常在北欧和西欧和北美的一些国家，以及澳大利亚的发病率比较高。从20世纪90年代起，原属于低发区的亚洲国家发病率呈逐年升高趋势，在我国，据上海、北京、等发达城市的统计，其发病率正逐年以2％-3％的速度递增，在女性恶性肿瘤中已属首位并成为威胁妇女健康的重要因素。据2010年中国肿瘤登记年报，城市居民发病率(51.24/10万)高于农村居民(19.6/10万)。乳腺癌已成为严重危及女性生命安全的恶性肿瘤。目前乳腺癌的病因尚不明确，遗传、内分泌、免疫功能与环境因素等相互作用，可能共同参与了癌变的演进过程。

在最初的研究中，长片段非编码RNA一直被认为基因组转录过程中的“噪声”或者是“暗物质”，主要原因是其长度、数量、种类、产生和作用方式、功能状况都不明确，并还缺乏对此类RNA的研究方法。之前的研究认为lncRNA是转录过程中的副产物，不编码蛋白质，并不具备生物学上的功能，而近年来的研究逐渐表明，lncRNA参与转录激活、转录的干扰以及转录后的调控；同时在基因组印记、X染色体沉默、染色质的修饰、以及原癌基因的活化等过程中起到重要作用。

目前的研究将lncRNA大致分为五类：1)正义lncRNA(Sense lncRNA)：当与同一链上另一转录物的一个或者多个外显子相重叠，即为正义lncRNA，也叫做同义lncRNA；2)反义lncRNA(atisense lncRNA)：其转录结果与反义链上的转录物的外显子相重叠时即为反义lncRNA；3)双向lncRNA(bidirectional lncRNA):此类lncRNA的表达起始位点与其互补链 上相邻编码转录物的表达起始点十分靠近；4)内含子lncRNA(Intronic lncRNA)：其序列来源于基因内部的内含子区域；5)基因间lincRNA(Long intergenic RNA，lincRNA)：位于两个基因间的间隔区域。

长片段基因间非编码RNA(Long intergenic noncoding RNA，lincRNA)是一类数量较多且功能研究较为清楚的lncRNA。目前研究已证明基因间存在大量的lincRNA，但其结构与功能方面研究得较成熟的仅仅有十几种。这些lincRNA具有不同的分子生物学功能，如作为调节肿瘤发生的作用因子、参与癌细胞的迁移。

与此同时，乳腺癌是严重危害女性健康的主要恶性肿瘤，发病率有逐年增高且呈趋于年轻化的趋势。随着分子生物学技术的发展，肿瘤的基因治疗层面上的研究已成为近年来的热点。在lncRNA的研究领域中，microRNA研究已逐渐明了，而与microRNA相比，lncRNA的研究尚处于起步阶段，而在乳腺癌的诊断和治疗中，非编码RNA表达与乳腺癌的相关性研究，报道很少。

发明内容

本发明的LincRNA是一种位于两个基因间区的非编码RNA，转录本长度超过200碱基的RNA，其长度介于200bp～100kb之间，此类ncRNA不具有编码蛋白质的功能，其结构具有多个茎环结构，能够与DNA、RNA或者转录因子相结合共同调节基因的转录或翻译过程，从而起到调节机体功能的作用。发明人在这种基础上，从乳腺癌组织及对应的癌旁组织中分离出检测乳腺癌准确度高的lincRNA生物标记物，并在此基础上，通过设计试剂盒来检测上述标记物，以及在设计试剂盒过程中设计的探针或探针组合、生物芯片。因此，本发明具有如下四个发明目的，以及围绕这四个发明目的多个技术方案：

本发明的第一个发明目的在于提供一组用于辅助检测乳腺癌，并且检测准确度高的lincRNA生物标记物以及其在乳腺癌辅助检测中的应用；